神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注后Bcl-2、Bax、VEGF表達(dá)的影響.pdf

1、背景與目的：缺血性腦血管病是當(dāng)今威脅中老年人生命與健康的常見病、多發(fā)病，在腦缺血過程中，神經(jīng)元出現(xiàn)死亡，并引起相應(yīng)的功能改變。腦缺血急性期，缺血中心區(qū)神經(jīng)元死亡以壞死為主，而缺血中心區(qū)周圍的神經(jīng)元?jiǎng)t以繼發(fā)性死亡為主，即以凋亡為主。細(xì)胞凋亡時(shí)伴隨著機(jī)體自身基因的表達(dá)，這些基因通過對(duì)細(xì)胞凋亡發(fā)生過程的干預(yù)而對(duì)凋亡進(jìn)行調(diào)控，目前發(fā)現(xiàn)凋亡相關(guān)基因(Bcl-2、Bax)與神經(jīng)元凋亡有非常密切的關(guān)系。其中Bcl-2具有對(duì)抗腦缺血，保護(hù)神經(jīng)元免受損傷

2、的功能。本研究通過建立大鼠局灶性腦缺血再灌注模型，予NGF處理，觀察不同時(shí)間點(diǎn)Bcl-2、Bax、vEGF表達(dá)的變化，探討NGF對(duì)局灶性腦缺血大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用。 方法：將60只健康SD大鼠，雌雄不限，鼠齡3～4個(gè)月，體重250～280克，隨機(jī)分為：正常對(duì)照組、假手術(shù)組(n=18)，缺血組(n=18)，NGF給藥組(n=18)，采用線拴法制作大腦中動(dòng)脈局灶性腦缺血模型，參考ZeaLonga 5分制評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分，1分以上(包括1分

3、)即為模型成功。于缺血90min實(shí)現(xiàn)再灌注，并于再灌注后當(dāng)時(shí)、再灌注24h、再灌注48h腹腔注射NGF 1.0ml(500U/ml，武漢海特生物制藥)，假手術(shù)組與缺血組大鼠于同一時(shí)間點(diǎn)腹腔注射同體積生理鹽水。各組大鼠分別于再灌注后24h、48h、72h處死。用HE染色觀察腦缺血后大腦的病理變化及NGF對(duì)其的影響，以免疫組織化學(xué)(ABC)方法研究腦缺血后大鼠皮層Bax、Bcl-2與VEGF表達(dá)。 結(jié)果：缺血組和給藥組缺血病灶位于大

4、腦中動(dòng)脈支配區(qū)的額頂葉皮層和尾狀核，部分大鼠的海馬CA1、CA2區(qū)也受累。與缺血組相比，給藥組神經(jīng)功能缺損癥狀明顯減輕。鏡下缺血組大鼠的缺血核心區(qū)細(xì)胞染色較淡，細(xì)胞數(shù)量明顯減少，細(xì)胞腫脹，細(xì)胞核碎裂溶解，缺血周邊區(qū)周圍血管擴(kuò)張，隨缺血時(shí)間延長(zhǎng)中心區(qū)細(xì)胞丟失更加明顯。給藥組大鼠缺血中心區(qū)及周邊區(qū)也可見上述改變，但各對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞損傷均較給藥組輕。缺血組和給藥組于大腦額項(xiàng)葉皮層可見Bcl-2、Bax免疫染色陽(yáng)性反應(yīng)(棕色)，染色部位為細(xì)胞漿

5、及突起，細(xì)胞核不著色，24h、48h、72h各時(shí)間點(diǎn)上給藥組Bcl-2、vEGF較缺血組表達(dá)明顯增多，Bax較對(duì)照組明顯減少(P<0.05)，Bcl-2/Bax比值增大。缺血組和給藥組VEGF陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)較多，與假手術(shù)組相比有顯著性差異(P<0.05) ，NGF給藥組在各時(shí)間點(diǎn)vEGF蛋白表達(dá)比缺血損傷組明顯增加。結(jié)論： 1、線栓法大鼠局灶性腦缺血損傷模型制作方法簡(jiǎn)單，具有較高的可靠性、重復(fù)性和實(shí)用性，是研究腦缺血/再灌注損傷較