商陸皂苷甲對(duì)CD4+T細(xì)胞分化為T(mén)h-17細(xì)胞及IL-17誘導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：通過(guò)觀察商陸皂苷甲(EsA)對(duì)CD4+T細(xì)胞分化成Th-17細(xì)胞及其分泌的IL-17的影響，以及EsA對(duì)IL-17誘導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞（rGMC）增殖的影響，探討EsA對(duì)增殖性腎炎的作用機(jī)制。
　　方法：①取雄性SD大鼠脾臟組織獲取淋巴細(xì)胞，將淋巴細(xì)胞分成對(duì)照組（僅含有淋巴細(xì)胞）、促分化組（加入 TGF-β、IL-6、IL-1β、TNF-α、CD3、CD28）及干預(yù)組（TGF-β、IL-6、IL-1β、TNF-α、CD3、C

2、D28及終濃度為5mg/L EsA進(jìn)行干預(yù)）。培養(yǎng)72h后，收集細(xì)胞及培養(yǎng)基上清液，采用ELISA法檢測(cè)各組IL-17的水平；采用半定量 RT-PCR法檢測(cè)各組 IL-17mRNA的相對(duì)表達(dá)水平；流式細(xì)胞儀檢測(cè)IL-17-PE+標(biāo)記的細(xì)胞百分比。②將 rGMC（細(xì)胞株 HBZY-1）分為對(duì)照組(僅加入rGMC)，IL-17(5ng/ml)組，IL-17(10ng/ml)組，IL-17(20ng/ml)組，IL-17(50ng/ml)組，

3、IL-17(100ng/ml)組，分別培養(yǎng)24h、48h、72h，MTT法檢測(cè)其對(duì)各組的rGMC增殖的影響，確定IL-17誘導(dǎo)rGMC增殖的作用濃度；將rGMC（細(xì)胞株HBZY-1）分為對(duì)照組（加入IL-17）、干預(yù)組（加入IL-17及終濃度為5mg/L EsA進(jìn)行干預(yù)），分別培養(yǎng)24h、48h、72h，利用MTT法檢測(cè)各組的rGMC的增殖情況，ELISA法檢測(cè)各組細(xì)胞上清液中纖維連接蛋白（FN）的水平。
　　結(jié)果：①RT-PCR

4、檢測(cè)結(jié)果示：與對(duì)照組比較，促分化組及干預(yù)組IL-17mRNA相對(duì)表達(dá)水平升高；與促分化組比較，干預(yù)組的IL-17mRNA相對(duì)表達(dá)水平明顯降低。②流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果示：與對(duì)照組比較，促分化組及干預(yù)組IL-17-PE+細(xì)胞所占百分比升高；與促分化組比較，干預(yù)組的IL-17-PE+細(xì)胞所占百分比降低。③ELISA法檢測(cè)IL-17結(jié)果示：與對(duì)照組比較，促分化組及干預(yù)組IL-17水平升高；與促分化組比較，干預(yù)組的IL-17水平明顯降低。④MTT法