甲強(qiáng)龍聯(lián)合霉酚酸對人腎小球系膜細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：
　　 1.觀察培養(yǎng)的人腎小球系膜細(xì)胞(human mesangial cells，HMCs)的形態(tài)學(xué)，掌握細(xì)胞培養(yǎng)的基本操作過程；
　　 2.觀察霉酚酸(MPA)、甲強(qiáng)龍(MP)及二者聯(lián)合對人腎小球系膜細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期及凋亡的影響，闡明藥物劑量、作用時間與效應(yīng)之間的關(guān)系。
　　 方法：
　　 37℃恒溫水浴箱中復(fù)蘇凍存的系膜細(xì)胞，并將細(xì)胞移入50 ml培養(yǎng)瓶中置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2、當(dāng)HMCs生長至80％貼壁時，傳代并繼續(xù)培養(yǎng)，傳至3-4代后，細(xì)胞活力較強(qiáng)，用于實(shí)驗(yàn)。
　　 系膜細(xì)胞接種于培養(yǎng)板中，第一步實(shí)驗(yàn)：用MTT法在490nm波長處檢測不同濃度的霉酚酸(0μmol·L-1、0.1μmol·L-1、0.5μmol·L-1、1μmol·L-1、5μmol·L-1、10μmol·L-1)及甲強(qiáng)龍(0 mg·L-1、1 mg·L-1、10 mg·L-1)分別作用24 h、48 h、72 h后的吸光度值，觀察藥

3、物對系膜細(xì)胞增殖抑制作用，然后對增殖抑制明顯組(MPA1μmol·L-1及MP1 mg·L-1)聯(lián)合作用48 h后檢測其對系膜細(xì)胞增殖抑制程度；第二步實(shí)驗(yàn)：霉酚酸(0μmol·L-1、1μmol·L-1、2.5μmol·L-1、5μmol·L-1、10μmol·L-1)及甲強(qiáng)龍(5 mg·L-1)分別作用48 h后，流式細(xì)胞儀檢測其對系膜細(xì)胞周期G0/G1(DNA合成前期)與S(DNA合成期)的影響，然后將MPA2.5μmol·L-1組

4、及MP5 mg·L-1組聯(lián)合作用并檢測其細(xì)胞周期的變化；第三步實(shí)驗(yàn)：霉酚酸(0μmol·L-1、1μmol·L-1、2.5μmol·L-1、5μmol·L-1、10μmol·L-1)及甲強(qiáng)龍(0mg·L-1、1 mg·L-1、10 mg·L-1)分別作用48 h后，流式細(xì)胞儀檢測其對系膜細(xì)胞凋亡的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1.霉酚酸、甲強(qiáng)龍及二者聯(lián)合作用時呈濃度依賴性抑制系膜細(xì)胞的增殖；霉酚酸濃度≥1μmol·L-1時

5、，抑制作用趨于穩(wěn)定；霉酚酸及甲強(qiáng)龍作用48 h后抑制作用最強(qiáng)；霉酚酸及甲強(qiáng)龍聯(lián)合作用后，其細(xì)胞增殖抑制率較單種藥物明顯增高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 2.霉酚酸可將系膜細(xì)胞周期阻滯于S期；甲強(qiáng)龍可將系膜細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期；二者聯(lián)合時對G0/G1期及S期均有阻滯作用，與對照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 3.霉酚酸可促進(jìn)系膜細(xì)胞凋亡，而小劑量甲強(qiáng)龍(≤10 mg·L-1)對系膜