促紅細胞生成素對新生HIBD大鼠Bcl-2及Bax蛋白表達的影響.pdf

1、目的: 圍生期窒息引起的缺氧缺血性腦損傷(HIBD)，常危及新生兒生命，是導致兒童神經系統(tǒng)傷殘的常見原因之一。近年研究發(fā)現，促紅細胞生成素(EPO)在新生兒HIBD發(fā)病機制中起重要作用。本實驗通過制備新生大鼠HIBD模型，腹腔注射外源性重組人促紅細胞生成素(rhEPO)，觀察不同劑量EPO對新生HIBD大鼠腦組織Bcl-2及Bax蛋白表達的影響，探討EPO神經保護作用的分子機制，以期為臨床治療新生兒HIBD提供有效的方法和途徑。

2、 方法: 1．制備HIBD模型：將新生7日齡wistar大鼠行頸部正中切口，分離結扎左側頸總動脈后給予低氧(8％O<,2>，92％N<,2>)處理2小時，制成HIBD模型。觀察缺氧時動物行為變化，并于光鏡下觀察腦組織病理改變。 2．行為能力檢查：分別于手術前及缺氧后1小時對每只大鼠進行翻身能力、夾尾左旋測試。 3．Bcl-2及Bax蛋白表達測定：42只新生7日齡wistar大鼠隨機分為假手術組、HIBD組

3、、生理鹽水對照組、EPO干預組，其中EPO干預組又分為大、中小、劑量三組，每組7只動物，于缺氧結束后立即一次性腹腔注射給藥，應用免疫組織化學染色方法，觀察給藥24小時后Bcl-2及Bax蛋白表達變化。 結果: 1．行為能力檢查術前每只大鼠均做翻身能力、夾尾左旋測定，42只全部正常。缺氧后l小時假手術組測定結果同前。經歷缺氧缺血的35只大鼠，19只不能翻身，28只出現夾尾左旋，13只表現不能翻身和夾尾左旋同時存在。

4、 2．HE染色及光鏡檢查結果假手術組：腦組織結構及細胞層次清楚，神經元形態(tài)正常，無腦水腫。HIBD組；腦組織水腫明顯，神經元排列紊亂，胞體皺縮，胞質深染，核濃縮，結構不清，伴有膠質細胞增生。 3.Bcl-2蛋白表達檢測結果 Bcl-2蛋白在假手術組中存在低水平表達，HIBD后表達明顯增高，EPO干預組較生理鹽水對照組及HIBD組更高。生理鹽水對照組與HIBD組相比，EPO大、中、小劑量三組兩兩相比差異無統(tǒng)計學意義。其余各組間比較

5、均有顯著性差異。 4.Bax蛋白表達檢測結果 Bax蛋白在假手術組中表達微弱，HIBD后表達明顯增高，EPO干預組較生理鹽水對照組及HIBD組表達降低。生理鹽水對照組與HIBD組相比，EPO大、中、小劑量三組兩兩相比差異無統(tǒng)計學意義。其余各組間比較均有顯著性差異。 5.Bcl-2與Bax比值的變化 Bcl-2/Bax在腦組織缺氧缺血性損傷后降低，EPO干預后又升高。生理鹽水對照組與HIBD組相比，EPO大、中、小劑量三組