mGM-CSF基因修飾性肺癌細(xì)胞瘤苗的構(gòu)建及其在動(dòng)物體內(nèi)作用的初步研究.pdf

1、本研究分為二部分： 第一部分 mGM-CSF基因修飾性肺癌瘤苗的構(gòu)建及鑒定 目的：以mGM-CSF基因修飾小鼠肺腺癌細(xì)胞系LA795構(gòu)建腫瘤疫苗，并鑒定mGM-CSF的表達(dá)水平。 方法：利用常規(guī)分子生物學(xué)方法設(shè)計(jì)并構(gòu)建含有一個(gè)mGM-CSF基因和一個(gè)EGFP基因的真核表達(dá)載體pIRES2-EGFP-mGM質(zhì)粒，經(jīng)EcoRⅠ及BamHⅠ雙酶切鑒定并測(cè)序。通過脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染LA795肺腺癌細(xì)胞，用熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞中E

2、GFP的表達(dá)，用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞中mGM-CSF的表達(dá)，最后照射滅活制備肺癌瘤苗。 結(jié)果：構(gòu)建了真核表達(dá)載體pIRES2-EGFP-mGM，用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染LA795肺癌細(xì)胞后，經(jīng)熒光顯微鏡和ELISA法檢測(cè)，可見細(xì)胞內(nèi)有EGFP及mGM-CSF的表達(dá)，mGM-CSF表達(dá)量適合制備腫瘤瘤苗。 結(jié)論：成功構(gòu)建真核表達(dá)載體plRES2-EGFP-mGM，并在LA795肺癌細(xì)胞中表達(dá)，轉(zhuǎn)染后的小鼠肺癌細(xì)胞能夠表達(dá)足夠功能正常

3、的mGM-CSF蛋白，經(jīng)照射滅活成功制備mGM-CSF分泌型LA795肺腺癌細(xì)胞瘤苗。 第二部分 mGM-CSF基因修飾性肺癌瘤苗在動(dòng)物體內(nèi)作用的初步研究 目的：初步探討mGM-CSF分泌型LA795肺癌瘤苗在動(dòng)物體內(nèi)所誘導(dǎo)的非特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)及其機(jī)制。 方法：將構(gòu)建完成的mGM-CSF分泌型LA795肺癌瘤苗免疫T739小鼠，同時(shí)設(shè)立無mGM-CSF基因修飾LA795肺癌瘤苗組及PBS對(duì)照組，應(yīng)用流式細(xì)胞法檢

4、測(cè)檢測(cè)小鼠血清IFN-γ的分泌水平、外周血免疫細(xì)胞分布、脾細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)等。 結(jié)果：mGM-CSF分泌型LA795肺癌瘤苗組免疫小鼠血清中IFN-γ的含量、外周血中CD8<'+>T的含量高于無mGM-CSF基因修飾LA795肺癌瘤苗組及PBS對(duì)照組(P均<0.01)，其脾細(xì)胞的非特異性殺傷能力顯著增加，亦遠(yuǎn)高于其與兩組(P<0.01)。 結(jié)論：mGM-CSF分泌型LA795肺腺癌細(xì)胞瘤苗可誘導(dǎo)自體T細(xì)胞向CTL方向增殖分化