mGM-CSF重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其基因治療腫瘤的初步研究.pdf

1、該實驗成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pcDNA3.1/mGM-CSF/Myc-His(-)(A)(簡稱為pc-mGM-CSF),建立了腫瘤動物模型,然后基因免疫小鼠,觀察GM-CSF的治療效果,為腫瘤的治療提供一種新的思路和方法.該實驗分為兩個部分:一、重組質(zhì)粒pc-mGM-CSF的構(gòu)建、表達和活性鑒定目的構(gòu)建pc-mGM-CSF重組質(zhì)粒載體,為研究GM-CSF治療腫瘤奠定基礎(chǔ).方法通過RT-PCR從Balb/c小鼠脾臟中獲得mGM-CSF基因,克

2、隆于pcDNA3.1/Myc-His(-)(A)質(zhì)粒上,用PCR、酶切及基因測序方法分別鑒定pc-mGM-CSF,然后用脂質(zhì)體將其轉(zhuǎn)染小鼠骨髓瘤細胞SP2/0,用G418篩選后通過RT-PCR和SDS-PAGE鑒定mGM-CSF表達,將轉(zhuǎn)染SP2/0的上清加入mGM-CSF依賴株NFS-60細胞,檢測蛋白活性.結(jié)果重組質(zhì)粒中含有mGM-CSF基因,在SP2/0中能表達,且其表達產(chǎn)物能分泌到細胞外并具有生物學(xué)活性.結(jié)論該實驗成功構(gòu)建含mG

3、M-CSF真核表達重組質(zhì)粒,有助于進一步研究其協(xié)同抗腫瘤作用.二、mGM-CSF基因免疫誘發(fā)小鼠協(xié)同抗腫瘤作用目的通過mGM-CSF基因免疫小鼠以誘發(fā)小鼠對腫瘤的免疫應(yīng)答,為GM-CSF基因治療腫瘤打下基礎(chǔ).方法用SP2/0腫瘤細胞皮下接種Balb/c小鼠建立腫瘤動物模型,再以皮下或肌肉注射空質(zhì)?；蛑亟M質(zhì)粒,8w后觀察致瘤率、腫瘤重量、腫瘤組織淋巴細胞的浸潤情況、檢測血清中IFN-γ和IL-2濃度以及MTT法體外檢測CTL、NK細胞活性

4、.結(jié)果基因免疫Balb/c小鼠8w后,重組質(zhì)粒皮I下注射組腫瘤重量(0.880±0.405g)輕于對照組(1.548±0.221g)(P<0.05);重組質(zhì)粒肌肉注射組腫瘤重量(0.378±0.411g)明顯輕于對照組(1.554±0.249g)(P<0.001);重組質(zhì)粒肌肉注射組腫瘤重量(0.378±0.411g)輕于重組質(zhì)粒皮下注射組(0.880±0.405g)(P<0.05);重組質(zhì)粒肌肉注射組腫瘤組織可見明顯的淋巴細胞浸潤;I