攜帶11R-p53和mGM-CSF基因載體的構(gòu)建及其表達(dá)和對(duì)腫瘤細(xì)胞作用的研究.pdf

1、本文旨在構(gòu)建攜帶有抗癌基因11R-P53和mGM-CSF基因的腺病毒載體，并檢測(cè)目的基因在體內(nèi)、體外腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)情況來(lái)驗(yàn)證其潛在的抗腫瘤效應(yīng)；通過(guò)比較其與腺病毒SG7605-11R-P53和SG7605-mGM-CSF治療小鼠肝癌模型后瘤體增長(zhǎng)情況的對(duì)比，來(lái)對(duì)我們的基因病毒治療系統(tǒng)SG655-mGMP的靶向性、有效性和安全性作以評(píng)價(jià)。
　　目的：構(gòu)建攜帶11R-P53和mGM-CSF基因的病毒質(zhì)粒并檢測(cè)其在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)及其

2、對(duì)腫瘤的抑制作用。方法：利用酶切法重組目的基因并整合到腺病毒E1B-55KD區(qū)，測(cè)序正確后包裝并大量制備病毒質(zhì)粒，并命名為SG655-mGMP。采用50%組織培養(yǎng)感染劑量（TCID50）法測(cè)定病毒滴度。用MOI=5的腺病毒SG655-mGMP體外轉(zhuǎn)染 BJ細(xì)胞、Hep3B細(xì)胞、Huh7細(xì)胞及Hepa1-6細(xì)胞并用western blot法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液中目的基因的表達(dá)情況；在體內(nèi)，用處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的Hepa1-6細(xì)胞按每只5×106的細(xì)

3、胞量接種于40只C57BL/6小鼠皮下，成瘤10mm左右時(shí)將小鼠隨機(jī)分為A、B、C、D四組，分別瘤內(nèi)多點(diǎn)注射SG655-mGMP、SG7605-11R-P53、SG7605-mGM-CSF和生理鹽水。用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測(cè)各組小鼠腫瘤組織中P53基因和mGM-CSF基因表達(dá)情況并測(cè)量小鼠腫瘤生長(zhǎng)狀況，并測(cè)量各組小鼠腫瘤在治療后腫瘤生長(zhǎng)狀況。結(jié)果：成功構(gòu)建 SG655-mGMP，測(cè)其滴度為7.3×109PFU/ml；目的基因可在體外