微小RNA-548Z與CD147基因多態(tài)性相互作用對急性心肌梗死的影響.pdf

1、目的:
　　本研究主要探討microRNA-548z(miR-548z)是否能與CD147基因3'非翻譯區(qū)(untranslated region，UTR)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(single nucleotide polymorphism，SNP) rs8259 T/A結(jié)合，以及結(jié)合后對急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)患者CD147表達(dá)的影響。
　　方法:
　　通過生物信息學(xué)

2、方法預(yù)測CD147基因3'UTR上可能結(jié)合的miRNAs，并與NCBI數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對，選出與rs8259 T/A結(jié)合的miRNA(即miR-548z)，運(yùn)用雙熒光素酶報告基因驗(yàn)證miR-548z與rs8259 T/A的相互作用。以30例AMI患者及13例正常人作為研究對象，應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(polymerasechain reaction-restriction fragment length polymorphi

3、sm，PCR-RFLP)技術(shù)檢測CD147基因rs8259位點(diǎn)的基因型，并通過直接測序法驗(yàn)證所獲得基因型的真實(shí)性。外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)中miR-548z及CD147 mRNA的表達(dá)采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative polymerase chainreaction qPCR)法檢測，應(yīng)用Westem Blot法檢測PBMCs中CD147蛋白的

4、表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　(1)運(yùn)用TargetScan在線軟件預(yù)測顯示，CD147基因3'UTR存在多個miRNA結(jié)合位點(diǎn)。再與NCBI數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對，我們發(fā)現(xiàn)CD147基因3'UTR的SNP位點(diǎn)rs8259恰好位于miR-548z結(jié)合的種子區(qū)。
　　(2)雙熒光素酶報告基因結(jié)果顯示，mimic miR-548z能夠抑制攜帶CD147基因rs8259位點(diǎn)T等位基因載體的熒光素酶活性，并且該效應(yīng)呈劑量依賴性。而對攜帶A等

5、位基因的載體無類似作用。
　　(3)以U6作為內(nèi)參，比較AMI患者與正常人PBMCs中miR-548z的相對表達(dá)水平，兩組間并無統(tǒng)計學(xué)差異（p值為0.825）。
　　(4)同樣以U6作為內(nèi)參，比較AA型和TT型AMI患者PBMCs中miR-548z的相對表達(dá)水平，兩組間無統(tǒng)計學(xué)差異（p值為0.518）。
　　(5)AMI患者AA型和TT型PBMCs中CD147 mRNA的表達(dá)水平無差異(p=0.645);
　　(