CD147與GLUT1在人惡性黑素瘤細胞中相互作用的研究.pdf

1、研究目的:
　　CD147是免疫球蛋白超家族成員中的一種跨膜糖蛋白，本實驗室前期研究表明CD147能促進惡性黑素瘤增殖、侵襲、轉移和血管新生，但具體機制尚不完全清楚。葡萄糖轉運蛋白1(glucose transportermember1 GLUT1)是一種分布在細胞膜的跨膜糖蛋白，介導葡萄糖在細胞膜上的轉運，在細胞攝取利用葡萄糖過程中發(fā)揮重要作用。本研究擬通過對CD147與GLUT1在惡性黑素瘤細胞株A375中及人惡性黑色素瘤組織

2、中相互作用的研究，明確其作用位點，在細胞中對于葡萄糖攝取的影響，為進一步明確惡性黑素瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制提供理論依據(jù)。
　　研究方法:
　　1.用組織芯片免疫組化技術明確CD147、GLUT1在惡性黑素瘤組織中的表達及二者相關性。
　　2.運用細胞免疫熒光技術觀察A375細胞中CD147與GLUT1的定位。
　　3.構建GLUT1與CD147全長及缺失突變體的真核表達載體。
　　4.運用免疫共沉淀技術驗證C

3、D147與GLUT1相互結合，共轉染GLUT1質粒及CD147的不同缺失突變體質粒至工具細胞293FT，分析CD147與GLUT1相互結合的位點。
　　5.分別用A375及A375穩(wěn)定干擾CD147細胞行裸鼠皮下成瘤。運用micro PET/CT成像技術檢測兩組裸鼠葡萄糖攝取的變化。然后用免疫組化方法分別檢測移植瘤中CD147與GLUT1的表達。
　　研究結果:
　　1.免疫組化檢測出GLUT1與CD147在人惡性黑素

4、瘤中均有表達且二者正相關，具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　2.細胞免疫熒光發(fā)現(xiàn)A375細胞中CD147與GLUT1在細胞膜存在共定位現(xiàn)象。
　　3.成功構建了GLUT1與CD147全長及缺失突變體的真核表達載體。
　　4.Co-IP驗證GLUT1與CD147相互作用的結果，并進一步證實CD147與GLUT1相互結合的區(qū)段位于CD147胞外第二個Ig樣結構域。
　　5.CD147干擾的A375細胞與正常A37

5、5細胞在裸鼠皮下成瘤。microPET/CT掃描顯示干擾CD147后裸鼠裸鼠移植瘤攝取葡萄糖明顯下(P＜0.05)。且免疫組化結果證實，干擾CD147組的移植瘤中，CD147與GLUT1的表達明顯下降。
　　結論
　　CD147分子不僅能與GLUT1相互作用，CD147與GLUT1相互結合的區(qū)段位于CD147胞外第二個IgG樣結構域，且CD147能正調節(jié)惡性黑素瘤細胞葡萄糖轉運過程，為CD147參與惡性黑素瘤的糖酵解過程提供