CD147與GLUT1在人惡性黑素瘤細(xì)胞中相互作用的研究.pdf

1、研究目的:
　　CD147是免疫球蛋白超家族成員中的一種跨膜糖蛋白，本實(shí)驗(yàn)室前期研究表明CD147能促進(jìn)惡性黑素瘤增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移和血管新生，但具體機(jī)制尚不完全清楚。葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(glucose transportermember1 GLUT1)是一種分布在細(xì)胞膜的跨膜糖蛋白，介導(dǎo)葡萄糖在細(xì)胞膜上的轉(zhuǎn)運(yùn)，在細(xì)胞攝取利用葡萄糖過程中發(fā)揮重要作用。本研究擬通過對(duì)CD147與GLUT1在惡性黑素瘤細(xì)胞株A375中及人惡性黑色素瘤組織

2、中相互作用的研究，明確其作用位點(diǎn)，在細(xì)胞中對(duì)于葡萄糖攝取的影響，為進(jìn)一步明確惡性黑素瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制提供理論依據(jù)。
　　研究方法:
　　1.用組織芯片免疫組化技術(shù)明確CD147、GLUT1在惡性黑素瘤組織中的表達(dá)及二者相關(guān)性。
　　2.運(yùn)用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)觀察A375細(xì)胞中CD147與GLUT1的定位。
　　3.構(gòu)建GLUT1與CD147全長(zhǎng)及缺失突變體的真核表達(dá)載體。
　　4.運(yùn)用免疫共沉淀技術(shù)驗(yàn)證C

3、D147與GLUT1相互結(jié)合，共轉(zhuǎn)染GLUT1質(zhì)粒及CD147的不同缺失突變體質(zhì)粒至工具細(xì)胞293FT，分析CD147與GLUT1相互結(jié)合的位點(diǎn)。
　　5.分別用A375及A375穩(wěn)定干擾CD147細(xì)胞行裸鼠皮下成瘤。運(yùn)用micro PET/CT成像技術(shù)檢測(cè)兩組裸鼠葡萄糖攝取的變化。然后用免疫組化方法分別檢測(cè)移植瘤中CD147與GLUT1的表達(dá)。
　　研究結(jié)果:
　　1.免疫組化檢測(cè)出GLUT1與CD147在人惡性黑素

4、瘤中均有表達(dá)且二者正相關(guān)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.細(xì)胞免疫熒光發(fā)現(xiàn)A375細(xì)胞中CD147與GLUT1在細(xì)胞膜存在共定位現(xiàn)象。
　　3.成功構(gòu)建了GLUT1與CD147全長(zhǎng)及缺失突變體的真核表達(dá)載體。
　　4.Co-IP驗(yàn)證GLUT1與CD147相互作用的結(jié)果，并進(jìn)一步證實(shí)CD147與GLUT1相互結(jié)合的區(qū)段位于CD147胞外第二個(gè)Ig樣結(jié)構(gòu)域。
　　5.CD147干擾的A375細(xì)胞與正常A37

5、5細(xì)胞在裸鼠皮下成瘤。microPET/CT掃描顯示干擾CD147后裸鼠裸鼠移植瘤攝取葡萄糖明顯下(P＜0.05)。且免疫組化結(jié)果證實(shí)，干擾CD147組的移植瘤中，CD147與GLUT1的表達(dá)明顯下降。
　　結(jié)論
　　CD147分子不僅能與GLUT1相互作用，CD147與GLUT1相互結(jié)合的區(qū)段位于CD147胞外第二個(gè)IgG樣結(jié)構(gòu)域，且CD147能正調(diào)節(jié)惡性黑素瘤細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)過程，為CD147參與惡性黑素瘤的糖酵解過程提供