新生血管形成與椎間盤退變相關(guān)性的臨床及基礎(chǔ)研究.pdf

1、目的:在人類脊柱退行性中椎間盤退變是病變是重要的病因。研究證實(shí)椎間盤退變始于終板鈣化，且退變鈣化過(guò)程與新生血管形成相伴行，但具體作用至今不明。骨髓內(nèi)皮前體細(xì)胞(Endothelial Progenitor Cells，EPCs)有分化成正常人體多種細(xì)胞的可能，其與人體其他組織器官的新生血管形成有很大關(guān)系:在人體椎間盤退變過(guò)程中，椎間盤內(nèi)部的新生血管形成與退變鈣化的演進(jìn)過(guò)程有某種關(guān)聯(lián)，其作用不僅只限于“管道”輸送，而是存在EPCs誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化

2、直接參與鈣化進(jìn)程的可能。目前該領(lǐng)域尚未見相關(guān)研究報(bào)道。立足前期研究，本課題擬先構(gòu)建改良型的C57/BL6小鼠腰椎間盤退變模型，探討血管形成與椎間盤退變鈣化演進(jìn)過(guò)程相關(guān)性;通過(guò)GFP熒光鼠骨髓移植檢測(cè)在已建模型椎間盤病變進(jìn)程中EPCs定位表達(dá)情況，并通過(guò)血管生成調(diào)控揭示其與椎間盤退變鈣化的相關(guān)性。
　　方法:
　　1.重新建立改良型的C57/BL6小鼠腰椎間盤退變模型，以此來(lái)探索小鼠椎間盤退變鈣化的進(jìn)程與椎間盤內(nèi)新生血管形成的

3、相關(guān)性:(1)構(gòu)建BMP-2納米PLGA緩釋微球:改良乳化冷凍凝聚法制各載BMP-2納米PLGA微球;(2)穿刺法制造大鼠腰椎間盤退變模型:在L3/4僅顯露，不做處理（陰性對(duì)照），L4/5椎間盤注入每組相同劑量BMP-2納米微球（陽(yáng)性對(duì)照），L5/6層面進(jìn)行針刺（實(shí)驗(yàn)組）;(3)新生血管形成與椎間盤退變鈣化情況分析:椎間盤HE染色、免疫組化檢測(cè)和Vonkossa染色;(4)統(tǒng)計(jì)分析:椎間盤退變鈣化進(jìn)程與新生血管形成相關(guān)性。
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4、.研究骨髓EPCs與椎間盤退變鈣化、新生血管形成相關(guān)性:(1)改良腰椎間盤退變小鼠模型，經(jīng)骨髓滅活，移植GFP熒光小鼠骨髓，構(gòu)建EPCs與小鼠腰椎間盤退變鈣化新生血管形成相關(guān)性模型(2)明確退變鈣化椎間盤里EPCs定位、表達(dá)情況及其與新生血管形成、退變鈣化三者的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　1.小鼠椎間盤退變、鈣化的檢測(cè)結(jié)果:①micro-CT掃描及重建顯示:小鼠L4/5、L5/6椎間盤高度逐漸下降。L5/6椎間盤有可見軟骨終板

5、的硬化，椎體骨贅形成，L3/4椎間盤椎間盤高度未見明顯改變。②HE染色結(jié)果:椎間盤損傷后L4/5、L5/6椎間盤出現(xiàn)明顯退變征象。1月后椎間高度丟失、纖維環(huán)結(jié)構(gòu)紊亂并開始出現(xiàn)裂隙，髓核細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞外機(jī)制變性;3月后椎間盤高度繼續(xù)丟失，纖維環(huán)髓核結(jié)構(gòu)紊亂，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。③Von kossa染色:3個(gè)月后L4/5椎間盤出現(xiàn)軟骨終板硬化，髓核鈣化。④免疫組化染色:3個(gè)月后椎間盤退變后髓核、纖維環(huán)、軟骨終板內(nèi)都有新生血管形成。⑤椎間盤內(nèi)新

6、生血管形成于椎間盤退變、鈣化的相關(guān)性分析:根據(jù)Mann-whitney U檢驗(yàn):P=0.039，L4/5、L5/6椎間盤鈣化程度比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，L4/5椎間盤的鈣化程度高于L5/6。根據(jù)Mann-whitney U檢驗(yàn): P=0.019，L4/5、L5/6椎間盤新生血管量的比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，L4/5椎間盤的新生血管量高于L5/6。采用Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn):新生血管形成與鈣化程度在L4/5、L5/6都有相關(guān)性(P＜0.01)。

7、
　　2.骨髓血管內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)與椎間盤退變鈣化、新生血管形成結(jié)果:①椎間盤EPC表達(dá)與椎間盤新生血管形成的比較:采用Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn):EPC的表達(dá)與新生血管形成在L4/5、L5/6都有相關(guān)性(P＜0.01)。②采用Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn):EPC的表達(dá)與鈣化程度在L4/5、L5/6都有相關(guān)性(P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　1.BMP-2納米PLGA微球的置入能夠促進(jìn)椎間盤的鈣化。在退變的椎間盤