SOX9基因與人頸椎間盤退變相關(guān)性的初步研究.pdf

1、[背景]頸椎間盤退變(Cervical intervertebral disc degeneration，CIDD)是頸椎病發(fā)病的始發(fā)因素，其發(fā)病機(jī)制仍不清楚。近年來(lái)遺傳因素在椎間盤退變(intervertebral disc degeneration，IDD)中所起的作用受到了越來(lái)越多的關(guān)注。以往的研究充分證明了IDD與細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)基因的突變有關(guān)，如Ⅱ型膠原和聚集蛋白多糖。Ⅱ型膠原在膠原合成和細(xì)胞外基質(zhì)組成成分均起重要的作用，而性別

2、決定基因組9[SRY(sex determining region Y)-box 9，SOX9]是一種重要的早期胚胎發(fā)育相關(guān)基因，在軟骨的發(fā)育、成熟過(guò)程中對(duì)Ⅱ型膠原如Ⅱ型膠原α1鏈(Collagen typeⅡalpha 1，COL2A1)合成起正向調(diào)控作用。為研究該基因在CIDD的作用，我們收集了行前路減壓、植骨內(nèi)固定頸椎病患者的髓核(Nucleus pulposus，NP)組織，采用HE、免疫組化、FQ-PCR及Western-bl

3、ot的方法，在mRNA、蛋白及細(xì)胞水平定性及定量測(cè)定不同退變程度頸椎間盤NP的SOX9及COL2A1基因表達(dá)水平。
　　 [目的]觀察不同退變程度人頸椎間盤NP的病理改變及SOX9、COL2A1的表達(dá)差異，并闡明兩者之間的關(guān)系，證實(shí)SOX9和COL2A1兩者的表達(dá)改變?cè)贑IDD過(guò)程中起著重要的作用。
　　 [方法]收集2010年02月至2011年05月在本院脊柱外科因頸椎病或頸椎外傷接受手術(shù)治療的NP組織，共36例，獲取

4、術(shù)前相應(yīng)頸椎MRI(T2加權(quán)像正中矢狀位)資料。取材均經(jīng)患者及其親屬的知情同意，并獲得長(zhǎng)海醫(yī)院倫理委員會(huì)的同意和認(rèn)可。采用頸椎椎間盤MRI退變Miyazaki分級(jí)系統(tǒng)評(píng)定術(shù)前NP組織標(biāo)本退變程度；HE染色顯微鏡下觀察不同退變程度時(shí)NP組織的病理改變，免疫組化檢測(cè)SOX9、COL2A1在NP組織中的定位；利用FQ-PCR、Western-blot檢測(cè)SOX9、COL2A1在mRNA及蛋白水平的表達(dá)；分析退變椎間盤中兩者含量與退變程度之間的

5、關(guān)系。
　　 [結(jié)果]隨著退變程度的加重，NP內(nèi)膠原纖維排列紊亂，纖維增粗，聚合成團(tuán)，NP逐漸纖維化；SOX9在NP細(xì)胞胞核中表達(dá)，COL2A1在細(xì)胞外基質(zhì)中表達(dá)；隨著NP退變程度的加重，兩者mRNA和蛋白表達(dá)水平均逐漸降低，不同退變等級(jí)頸椎間盤NP中兩者的表達(dá)均有顯著差異(P<0.05)；且SOX9與COL2A1含量呈直線相關(guān)：△△Ct(COL2A1)=0.923*△△Ct(SOX9)-0.059，SOX9正向調(diào)控COL2A1