頭孢妥侖膽汁排泄的分子機制及其對肝臟轉運蛋白調節(jié)作用的研究.pdf

1、目的：藥物轉運蛋白在藥物體內代謝過程中的重要作用及研究價值越來越多地受到研究者的關注。Mrp2，Bcrp是位于肝細胞膽管側膜上的ABC族轉運蛋白，可轉運許多內源性物質和外源性物質（如藥物），許多藥物也可調節(jié)轉運蛋白的表達。頭孢妥侖是第四代頭孢菌素類抗生素，研究介導其膽汁排泄的肝臟藥物轉運蛋白，對預測與頭孢妥侖相關的藥物間相互作用及了解β-內酰胺類抗生素的膽汁排泄機制有重要意義；了解藥物對藥物轉運蛋白表達情況的影響能夠使我們更清楚地從轉運

2、蛋白分子水平理解藥物的體內動力學變化，從而為臨床合理用藥提供理論依據(jù)和指導。本實驗通過in situ和in vivo方法研究參與頭孢妥侖膽汁排泄過程的藥物轉運蛋白及頭孢妥侖口服給藥后對肝臟主要轉運蛋白表達的影響。 方法：采用肝灌流實驗方法，研究頭孢妥侖是否經Mrp2、Bcrp或P-gp的轉運；采用RT-PCR和Western blot實驗，考察頭孢妥侖對肝臟主要轉運蛋白表達的影響： （1）肝灌流實驗，設立對照組（頭孢妥侖

3、（1μM））和實驗組（頭孢妥侖（1μM）和丙磺舒（Mrp2抑制劑）、新生霉素（Bcrp抑制劑）或維拉帕米（P-gp抑制劑）（20μM）），灌流Wistar大鼠肝臟，在設定時間點收集出口灌流液和膽汁樣品，高效液相色譜法測定樣品中頭孢妥侖含量，考察實驗組和對照組中肝攝取率和膽汁累積排泄率的差別。 （2）大鼠灌胃給藥，設立對照組（生理鹽水）和頭孢妥侖16mg/kg，50mg/kg，100mg/kg三個不同的劑量組，每天兩次，一周后，取

4、肝臟，提取總RNA，進行RT-PCR反應，檢測Mrp2，Bcrp，P-gp，Oct1和Oat2的mRNA的表達變化；（3）采用超速離心法提取膜蛋白Mrp2，運用Western blot方法測定不同劑量組中Mrp2蛋白表達的變化，考察其變化是否有劑量依賴性。 結果： （1）肝灌流實驗結果表明，實驗組和對照組相比，肝攝取率變化無統(tǒng)計學意義上的差別；在丙磺舒抑制劑組，肝臟灌流25分鐘后，大鼠的頭孢妥侖膽汁累積排泄率降低至對照組

5、的43．78%；新生霉素組的膽汁累積排泄率降至對照組的79．52%；維拉帕米做P-gp抑制劑時，頭孢妥侖的膽汁累積排泄率與對照組相比，無統(tǒng)計學意義上的差別。 （2）大鼠灌胃給予頭孢妥侖一周后，Mrp2，Bcrp和Oat2 mRNA的表達增多，且100mg/kg劑量組mRNA表達明顯多于16mg/kg劑量組；P-gp和Oct1的mRNA表達減少，與頭孢妥侖劑量的增加呈反向變化。（3）Western blot與RT-PCR結果一致，

6、Mrp2蛋白表達增多，且100mg/kg劑量組中Mrp2蛋白表達是對照組的1．7倍，16mg/kg劑量組中Mrp2蛋白表達是對照組的1．32倍。 結論： （1）Mrp2在頭孢妥侖的膽汁排泄過程中起主要作用，Bcrp也參與其膽汁排泄過程，而P-gp不介導頭孢妥侖的膽汁排泄。 （2）頭孢妥侖可增加Mrp2，Bcrp和Oat2的mRNA表達，減少P-gp和Oct1的mRNA表達，且這種調節(jié)作用有劑量依賴性。 （