IL-33誘導(dǎo)自噬緩解小鼠實驗性腸炎的研究.pdf

1、背景：IL-33作為IL-1家族的新成員，廣泛表達于全身各組織，尤其在胃腸道組織中。本課題組之前報道，在TNBS誘導(dǎo)的小鼠腸炎模型中，IL-33在結(jié)腸組織中增多，并起緩解的作用。自噬是存在于真核細胞中的一種現(xiàn)象，通過自噬小體與溶酶體的結(jié)合，降解細胞中受損的蛋白與細胞器，產(chǎn)生氨基酸等小分子供細胞重復(fù)利用。有文獻報道，自噬相關(guān)基因的缺失與腸炎的易感性相關(guān)。有文獻報道 IL-1家族成員IL-1α和IL-1β能誘導(dǎo)巨噬細胞產(chǎn)生自噬。因此IL-3

2、3可能通過誘導(dǎo)自噬來緩解腸炎。
　　目的：探究IL-33如何通過自噬來緩解腸炎。
　　方法：⑴小鼠腸炎模型的制備：第0天經(jīng)直腸緩慢注射TNBS溶液，每天記錄小鼠體重，第4天時，處死小鼠，收集樣本。⑵成功制備TNBS誘導(dǎo)的小鼠腸炎模型后，通過用western blot方法檢測腸炎組與對照組小鼠結(jié)腸組織自噬相關(guān)蛋白LC3II與LC3I比值的變化。⑶誘導(dǎo)腸炎后，術(shù)后0天起雷帕霉素灌胃（2mg/kg），3-MA腹腔注射（24mg/k

3、g），IL-33腹腔注射（2μg/day），PBS腹腔注射（與IL-33同體積）。觀察小鼠體重的變化，測量小鼠結(jié)腸長度，HE染色檢測炎癥細胞浸潤和腸壁結(jié)構(gòu)變化，western blot檢測腸道組織自噬相關(guān)蛋白LC3II與LC3I比值的變化。⑷提取小鼠骨髓來源的巨噬細胞進行體外培養(yǎng)，第7天時，給予IL-33刺激24h，氯喹刺激10h。收集細胞提取蛋白檢測自噬相關(guān)蛋白LC3II與LC3I比值的變化和P62的變化。
　　結(jié)果：①成功建立

4、TNBS誘導(dǎo)的小鼠腸炎模型。②與對照組比，腸炎組小鼠結(jié)腸組織中自噬蛋白LC3II與LC3I比值增高。③自噬激活劑雷帕霉素可以緩解腸炎，而自噬抑制劑3-MA卻加重腸炎。④給IL-33能緩解腸炎并增加自噬蛋白LC3II與LC3I比值的表達。⑤在體外，IL-33可以誘導(dǎo)巨噬細胞自噬蛋白LC3II與LC3I比值增多，給予氯喹后進一步證明IL-33可以誘導(dǎo)自噬。
　　結(jié)論：⑴在TNBS誘導(dǎo)的小鼠腸炎中結(jié)腸組織中自噬是增加的，并起保護性作用。