IL-33轉(zhuǎn)基因小鼠的建立和IL-33對肺部炎癥的增強(qiáng)作用.pdf

1、白細(xì)胞介素33( Interleukin33, IL-33)是近年發(fā)現(xiàn)的IL-1類細(xì)胞因子家族的成員。它的受體是早于它被發(fā)現(xiàn)的孤兒受體ST2。作為細(xì)胞表面受體的ST2主要表達(dá)于Th2輔助性淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞等細(xì)胞表面，IL-33具有促進(jìn)Th2細(xì)胞免疫的作用。而在臨床上IL-33和ST2與自身免疫病、變態(tài)反應(yīng)性疾病、心血管疾病和神經(jīng)退行性病變等的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，從而引起人們的關(guān)注。小鼠腹腔注射重組的IL-33分子，動物表現(xiàn)為呼吸道和消化道的

2、炎癥損傷，脾臟腫大。而對于動物體內(nèi)內(nèi)源性的ILr33表達(dá)上升的研究目前未有報(bào)道。在分子結(jié)構(gòu)上ILr33分子具有核定位功能域和IL,-1類細(xì)胞因子活性功能域。IL-33分子本身缺乏分泌信號，目前對于IL-33細(xì)胞因子的分泌釋放和它作為活性細(xì)胞因子的分泌形式等都存在著爭議。為了研究IL-33在小鼠體內(nèi)的內(nèi)源性表達(dá)及其對動物的影響，我們首先從新生小鼠的組織中克隆了小鼠的IL-33基因，并將該基因構(gòu)建到以 CMV為啟動子的真核表達(dá)載體pCDNA

3、3.1上，通過顯微注射的方式建立了CMV-mIL-33的轉(zhuǎn)基因小鼠。通過免疫印跡分析檢測到在轉(zhuǎn)基因小鼠的肺臟、心臟、腎臟和胰腺組織中IL-33表達(dá)提高。高表達(dá)的ILr33分子在肺臟組織以18 kDa的形式分泌到呼吸道。通過雙向電泳分析18 kDa分子的等電點(diǎn)性質(zhì)，發(fā)現(xiàn)高表達(dá)的18 kDa的IIr33分子更接近于小鼠ILr33分子中有功能活性的109-266 aa肽段的膚段等電點(diǎn)性質(zhì)。 mIL-33轉(zhuǎn)基因?qū)π∈蟮某錾?、性別比率、體重等并

4、沒有產(chǎn)生影響。大體解剖和組織學(xué)分析沒有發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因動物的腦、心臟、肝臟、脾臟、’腎臟、小腸等受到影響。病理學(xué)分析發(fā)現(xiàn)IL-33轉(zhuǎn)基因小鼠的肺臟出現(xiàn)炎癥性反應(yīng):在支氣管和小血管周圍出現(xiàn)了包括嗜酸性粒細(xì)胞在內(nèi)的炎性細(xì)胞浸潤;在轉(zhuǎn)基因小鼠的呼吸道出現(xiàn)了杯狀細(xì)胞的高反應(yīng)性和粘液性物質(zhì)的聚集;對肺組織灌洗液的分析發(fā)現(xiàn)灌洗液中的嗜酸性粒細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等各類炎性細(xì)胞數(shù)目增加，炎性細(xì)胞因子IL-5, IL-8, IL-13的水平提