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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
以MSU誘導(dǎo)的小鼠實(shí)驗(yàn)性急性痛風(fēng)為痛風(fēng)研究模型,來(lái)探討IL-33在急性痛風(fēng)中的作用及其機(jī)制。
方法和結(jié)果:
1.重組小鼠IL-33的原核表達(dá)以及純化
GST-IL-33融合蛋白經(jīng)過(guò)原核表達(dá)、純化,去除GST標(biāo)簽等步驟,獲得了較高純度的的mrIL-33。
2.對(duì)急性痛風(fēng)患者血清中IL-33的研究
通過(guò)收集臨床急性痛風(fēng)患者41例(男39例,女2例)年齡26~91歲,平均58
2、.3歲和44例年齡、性別與之匹配的健康志愿者的血清標(biāo)本,檢測(cè)血清中IL-33的含量。結(jié)果顯示急性痛風(fēng)患者血清中IL-33的含量明顯高于健康志愿者,并且在痛風(fēng)患者中,血清中IL-33的含量與CRP值呈正相關(guān)。
3.急性痛風(fēng)中IL-33的來(lái)源及產(chǎn)生機(jī)制
本實(shí)驗(yàn)室前期數(shù)據(jù)表明急性痛風(fēng)患者的WBC基本不表達(dá)IL-33。本課題,我們分別用MSU以及促炎因子(IL-1β和TNFα)刺激關(guān)節(jié)滑膜成纖維細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明①IL-1β
3、和TNF-α共同刺激關(guān)節(jié)滑膜成纖維細(xì)胞顯著表達(dá)IL-33,②MSU同樣可以刺激關(guān)節(jié)滑膜成纖維細(xì)胞高表達(dá)IL-33。
4.IL-33在小鼠實(shí)驗(yàn)性急性痛風(fēng)中的效應(yīng)研究
4.1.IL-33明顯緩解MSU誘導(dǎo)的小鼠急性痛風(fēng)
將6-8周的雄性C57BL/6小鼠分為PBS組、MSU組、IL-33組和IL-33+MSU組共四組,PBS組和MSU組的小鼠先PBS預(yù)處理4天,IL-33組和IL-33+MSU組的小鼠先用2μg
4、/d rIL-33預(yù)處理4天,第四天預(yù)處理后,立即將MSU組和IL-33+MSU組腹腔注射給予3mg MSU,PBS組和IL-33組腹腔注射PBS做相應(yīng)的對(duì)照。16h后收集腹腔里面的細(xì)胞和上清。中性粒細(xì)胞作為痛風(fēng)的主要效應(yīng)細(xì)胞,我們通過(guò)分析各組腹腔中募集的中性粒細(xì)胞的總數(shù),發(fā)現(xiàn)IL-33+MSU組的中性粒細(xì)胞數(shù)明顯低于MSU組;此外,IL-1β作為痛風(fēng)關(guān)鍵促炎因子,我們檢測(cè)上清中IL-1β的含量,結(jié)果顯示IL-33+MSU組的IL-1β
5、含量也明顯低于MSU組,綜上所述,我們得出結(jié)論:IL-33明顯緩解了MSU誘導(dǎo)的急性痛風(fēng)。
4.2.IL-33促進(jìn)抑炎因子的表達(dá)
小鼠在經(jīng)IL-33預(yù)處理后,收集的腹腔上清進(jìn)行ELISA檢測(cè),結(jié)果顯示:IL-33+MSU組的IL-13和IL-10等抑炎因子表達(dá)量明顯高于MSU組。
4.3.IL-33誘生MDSCs
小鼠在經(jīng)IL-33腹腔注射預(yù)處理后,收集的腹腔細(xì)胞,流式分析可見(jiàn)大量表面標(biāo)志為CD1
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