IL-33在痛風(fēng)中的作用及其機制.pdf

1、目的:
　　以MSU誘導(dǎo)的小鼠實驗性急性痛風(fēng)為痛風(fēng)研究模型，來探討IL-33在急性痛風(fēng)中的作用及其機制。
　　方法和結(jié)果:
　　1.重組小鼠IL-33的原核表達以及純化
　　GST-IL-33融合蛋白經(jīng)過原核表達、純化，去除GST標簽等步驟，獲得了較高純度的的mrIL-33。
　　2.對急性痛風(fēng)患者血清中IL-33的研究
　　通過收集臨床急性痛風(fēng)患者41例（男39例，女2例）年齡26～91歲，平均58

2、.3歲和44例年齡、性別與之匹配的健康志愿者的血清標本，檢測血清中IL-33的含量。結(jié)果顯示急性痛風(fēng)患者血清中IL-33的含量明顯高于健康志愿者，并且在痛風(fēng)患者中，血清中IL-33的含量與CRP值呈正相關(guān)。
　　3.急性痛風(fēng)中IL-33的來源及產(chǎn)生機制
　　本實驗室前期數(shù)據(jù)表明急性痛風(fēng)患者的WBC基本不表達IL-33。本課題，我們分別用MSU以及促炎因子(IL-1β和TNFα)刺激關(guān)節(jié)滑膜成纖維細胞，實驗結(jié)果表明①IL-1β

3、和TNF-α共同刺激關(guān)節(jié)滑膜成纖維細胞顯著表達IL-33，②MSU同樣可以刺激關(guān)節(jié)滑膜成纖維細胞高表達IL-33。
　　4.IL-33在小鼠實驗性急性痛風(fēng)中的效應(yīng)研究
　　4.1.IL-33明顯緩解MSU誘導(dǎo)的小鼠急性痛風(fēng)
　　將6-8周的雄性C57BL/6小鼠分為PBS組、MSU組、IL-33組和IL-33+MSU組共四組，PBS組和MSU組的小鼠先PBS預(yù)處理4天，IL-33組和IL-33+MSU組的小鼠先用2μg

4、/d rIL-33預(yù)處理4天，第四天預(yù)處理后，立即將MSU組和IL-33+MSU組腹腔注射給予3mg MSU，PBS組和IL-33組腹腔注射PBS做相應(yīng)的對照。16h后收集腹腔里面的細胞和上清。中性粒細胞作為痛風(fēng)的主要效應(yīng)細胞，我們通過分析各組腹腔中募集的中性粒細胞的總數(shù)，發(fā)現(xiàn)IL-33+MSU組的中性粒細胞數(shù)明顯低于MSU組;此外，IL-1β作為痛風(fēng)關(guān)鍵促炎因子，我們檢測上清中IL-1β的含量，結(jié)果顯示IL-33+MSU組的IL-1β

5、含量也明顯低于MSU組，綜上所述，我們得出結(jié)論:IL-33明顯緩解了MSU誘導(dǎo)的急性痛風(fēng)。
　　4.2.IL-33促進抑炎因子的表達
　　小鼠在經(jīng)IL-33預(yù)處理后，收集的腹腔上清進行ELISA檢測，結(jié)果顯示:IL-33+MSU組的IL-13和IL-10等抑炎因子表達量明顯高于MSU組。
　　4.3.IL-33誘生MDSCs
　　小鼠在經(jīng)IL-33腹腔注射預(yù)處理后，收集的腹腔細胞，流式分析可見大量表面標志為CD1