去上皮人羊膜修復(fù)兔輸尿管缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 探討使用去上皮人羊膜重建兔輸尿管缺損的可行性及其效果。 方法： 實(shí)驗(yàn)分兩個(gè)部分進(jìn)行。 第一部分：采用胰蛋白酶消化法獲取大白兔膀胱移行上皮細(xì)胞，放入含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長增殖情況。胰蛋白酶消化去除人羊膜上皮細(xì)胞層，制成去上皮人羊膜標(biāo)本，再取兔膀胱移行上皮細(xì)胞負(fù)載于去上皮人羊膜上加入含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基共同培養(yǎng)，觀察兔膀胱移行上皮在去上皮人羊膜上

2、貼附、生長及增殖情況。 第二部分：使用裁剪成4.5 cm×0.5 cm的片狀去上皮人羊膜，圍繞硬膜外導(dǎo)管縫合成袖套狀；將兔左側(cè)輸尿管從中上段切除4 cm，制成單側(cè)輸尿管缺損模型。使用縫合好的其內(nèi)有支架管的袖套狀去上皮人羊膜輸尿管上下兩側(cè)端端吻合于兔輸尿管，手術(shù)共成功進(jìn)行18例。術(shù)后飼養(yǎng)兔3個(gè)月，行靜脈尿路造影檢查，觀察輸尿管暢通狀況。造影后將兔處死，解剖觀察人羊膜支架體內(nèi)狀況；取人羊膜輸尿管組織行HE染色檢查，免疫組織化學(xué)平滑肌

3、細(xì)胞α-Actin和移行上皮細(xì)胞角蛋白CKAE1/AE3檢查，觀察去上皮人羊膜支架輸尿管上平滑肌和上皮細(xì)胞生長情況。 結(jié)果： 體外兔膀胱移行上皮細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，原代細(xì)胞12～24小時(shí)可貼壁，36小時(shí)后生長加速，5～7天可以達(dá)到80％融合，呈鋪路石狀排列。兔膀胱移行上皮細(xì)胞在去上皮人羊膜上生長良好，接種第2天細(xì)胞即已附著于羊膜基底面，72小時(shí)細(xì)胞基本形成層狀排列，7～14天內(nèi)融合成單細(xì)胞層。大白兔輸尿管缺損修復(fù)手術(shù)共進(jìn)行18

4、例，6例在術(shù)后3月內(nèi)因感染死亡，剩余12只兔在3個(gè)月時(shí)進(jìn)行了靜脈尿路造影，檢查顯示術(shù)側(cè)輸尿管通暢，造影劑順利通過，管腔與未手術(shù)側(cè)相比無明顯狹窄，腎盂內(nèi)無積水，其中術(shù)側(cè)輸尿管顯影良好7只，部分顯影3只，顯影不佳2只。肉眼觀察發(fā)現(xiàn)人羊膜輸尿管與周圍組織粘連，羊膜輸尿管表面有豐富的血運(yùn)，管腔大小正常，無明顯攣縮。顯微鏡下觀察，人羊膜輸尿管已形成移行上皮層和平滑肌層，免疫組化檢查人羊膜輸尿管組織平滑肌細(xì)胞α-Actin染色和移行上皮細(xì)胞CKAE

5、1/AE3染色均為陽性。 結(jié)論： 在合適的培養(yǎng)環(huán)境中，兔膀胱移行上皮細(xì)胞可以較大規(guī)模培養(yǎng)。兔膀胱移行上皮細(xì)胞在去上皮人羊膜上能夠很好的貼附、生長和增殖，2周左右可以形成單細(xì)胞層；去上皮人羊膜是兔膀胱移行上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)的良好載體。以去上皮人羊膜作為重建大白兔輸尿管缺損的支架材料，術(shù)后人羊膜支架無明顯攣縮或壞死，其上可以形成輸尿管上皮層和肌肉層，能夠恢復(fù)正常的泌尿管道連接功能。去上皮人羊膜具有作為泌尿系統(tǒng)腔道組織工程支架的