兔角膜緣上皮細胞培養(yǎng)聯(lián)合羊膜行自體移植的實驗研究.pdf

1、目的:研究運用體外培養(yǎng)的角膜緣干細胞聯(lián)合人羊膜的方法,行自體移植治療角膜緣干細胞完全缺乏的兔眼.方法:選用健康新西蘭白兔20只,顯微鏡下手術(shù)制成右眼角膜緣干細胞缺乏的兔眼模型,其中12只兔左眼取少量的角膜緣組織進行體外培養(yǎng)、擴增一周左右,然后傳代并種植于無上皮的人羊膜上,繼續(xù)培養(yǎng)約20天左右制成人工合成角膜上皮移植片,采用自體移植的方法,移植到相應(yīng)的12只角膜緣干細胞完全缺乏的兔眼模型上,另外8只兔只進行無上皮細胞羊膜的移植.結(jié)果:移植

2、了含有自體角膜上皮細胞的羊膜的兔眼,術(shù)后早期都形成了角膜上皮化并明顯抑制了新生血管的再生,通過角膜熒光素染色、蘇木素-伊紅(HE)染色、細胞角蛋白AE1單克隆抗體免疫組化以及掃描電鏡和透射電鏡觀察,證明培養(yǎng)并移植的角膜上皮與正常的角膜上皮無明顯差異;而只接受羊膜移植的兔子,術(shù)后患眼又出現(xiàn)角膜混濁和明顯的新生血管,角膜HE染色示復(fù)層上皮細胞,排列不規(guī)則,夾雜空泡樣杯狀細胞,其下基質(zhì)可見炎性細胞、紅細胞和新生血管,表明角膜表面有結(jié)膜上皮覆蓋