個性化食物sIgG試劑盒的研制及本地區(qū)5種食物不耐受組分分析.pdf

1、目的:
　　食物不耐受是一種復(fù)雜的變態(tài)反應(yīng)性疾病，它的發(fā)生與許多慢性疾病密切相關(guān)。然而，臨床現(xiàn)用食物不耐受特異性IgG檢測試劑價格昂貴、方法不靈活，限制了食物不耐受檢測項目的廣泛開展和臨床應(yīng)用。本研究旨在研制一種個性化食物特異性IgG檢測試劑盒，從而實現(xiàn)不同抗原的靈活選擇和隨機組合，將傳統(tǒng)的“套餐式”檢測模式，改進為個性化的“訂單式”檢測模式;調(diào)查本地區(qū)普通人群5種常見食物的不耐受情況，并分析其發(fā)病率與年齡、性別的關(guān)系;以特異性I

2、gG抗體為識別“探針”，分析食物蛋白提取液中引起不耐受的蛋白組分，為食物不耐受患者進行更有針對性的脫敏治療提供可靠依據(jù)。
　　方法:
　　1.個性化食物特異性IgG檢測試劑盒的研制:以日常生活中常見的5種食物為例，制備食物的蛋白提取液，經(jīng)SDS-PAGE分析其完整性;用長臂活化生物素標(biāo)記食物蛋白，并用斑點印跡法檢測其免疫活性，將其作為已知抗原備用;制備生物素化牛血清白蛋白-鏈霉親和素酶標(biāo)反應(yīng)板，作為通用反應(yīng)板;通過條件優(yōu)化和

3、最適稀釋度的選擇，確定反應(yīng)的最佳條件;對所建立的方法進行方法學(xué)評價和相關(guān)性分析。
　　2.本地區(qū)5種食物不耐受情況調(diào)查及不耐受組分分析:收集體檢人群的靜脈血，按受試者年齡，將其分為青年組（≤30歲）、中年組（31歲～49歲）和老年組（≥50歲）三個組別。用本實驗建立的方法分析該人群對這5種食物的不耐受情況。用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS19.0，對所得數(shù)據(jù)進行分析，研究本地區(qū)食物不耐受與年齡和性別的關(guān)系。每種食物蛋白經(jīng)電泳、轉(zhuǎn)印后，用篩選出

4、的陰性和陽性單例血清分別做酶免疫印跡實驗，通過所得的抗體譜分析食物中的不耐受組分。
　　結(jié)果:
　　1.個性化食物特異性IgG檢測試劑盒的研制:5種食物蛋白經(jīng)SDS-PAGE鑒定蛋白成分完整，符合實驗要求;斑點免疫印跡顯示，生物素化的食物蛋白具有良好的免疫原性，可用于酶聯(lián)免疫吸附試驗中;制備的通用酶標(biāo)反應(yīng)板可用于檢測不同的食物特異性IgG。優(yōu)化反應(yīng)條件，建立個性化食物特異性IgG檢測方法。最后，方法學(xué)評價結(jié)果表明，該方法的批

5、內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于10％，食物間交叉反應(yīng)率均小于15％，標(biāo)準(zhǔn)曲線穩(wěn)定性較好，與臨床常用商品化試劑盒具有良好的相關(guān)性，r=0.961。
　　2.本地區(qū)5種食物不耐受情況調(diào)查及不耐受組分分析:本地區(qū)普通人群5種食物特異性IgG抗體總陽性率為81.07％，按陽性率高低依次排序為雞蛋、牛奶、帶魚、蟹、蝦，其陽性率分別是58.82％、51.92％、36.38％、34.27％、25.06％。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)軟件分析，證明食物不耐受與年齡和性別存在

6、相關(guān)關(guān)系。相對于成年人，老年人和兒童更易患病。女性特異性IgG抗體陽性率(45.14％)高于男性(30.87％)。5種食物的不耐受組分反應(yīng)情況不同。蛋清中4種主要蛋白均參與食物不耐受的反應(yīng)，不同個體間反應(yīng)情況基本相似;而牛奶、蝦、蟹和帶魚的蛋白成分較多，不耐受組分種類比較復(fù)雜，個體間的不耐受組分存在異質(zhì)性。
　　結(jié)論:
　　1.利用生物素-親和素系統(tǒng)制備的通用酶標(biāo)反應(yīng)板，可實現(xiàn)抗原包被過程與反應(yīng)過程的統(tǒng)一。并且此方法可根據(jù)待