化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移體系的研究及其在腫瘤細(xì)胞內(nèi)三磷酸腺苷檢測中的應(yīng)用.pdf

1、化學(xué)發(fā)光分析法具有很高的靈敏度，且具有儀器設(shè)備簡單、操作方便、快捷、線性響應(yīng)范圍寬和易于實(shí)現(xiàn)自動化等顯著優(yōu)點(diǎn)，越來越受到科研工作者的廣泛關(guān)注。本文研究了熒光素（Fluorescein，F(xiàn)）對Luminol-H2O2-HRP化學(xué)發(fā)光體系的增強(qiáng)作用，對其反應(yīng)機(jī)理進(jìn)行了研究，得到Luminol-H2O2-HRP-F化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移體系（CRET）?；谠揅RET體系，實(shí)現(xiàn)了對DNA的靈敏檢測。將該體系進(jìn)一步用于構(gòu)建化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移雙螺

2、旋分子信標(biāo)適體探針，實(shí)現(xiàn)了對K562癌細(xì)胞和4TI癌絀胞中ATP的快速檢測，檢測結(jié)果與HPLC法檢測結(jié)果具有良好的一致性。本方法靈敏度高，線性范圍寬，操作簡便，可用于腫瘤標(biāo)志物的快速、靈敏檢測。
　　 本文主要開展了以下幾個方面的工作：
　　 一、Luminol-H2O2-HRP-F化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光體系的研究
　　 研究了熒光素（Fluorescein，F(xiàn)）對Luminol-H2O2-HRP化學(xué)發(fā)

3、光反應(yīng)體系的增強(qiáng)作用，對其反應(yīng)機(jī)理進(jìn)行了研究，討論了Luminol-H2O2-HRP-F增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光體系的動力學(xué)性質(zhì)和熒光光譜性質(zhì)，研究了熒光素濃度對Luminol-H2O2-HRP化學(xué)發(fā)光熒光光譜的影響。在此基礎(chǔ)上，初步提出了Luminol-H2O2-HRP-F化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光體系。
　　 二、利用Luminuol還原HAuCl4法制備LumAuNPs納米粒子的研究
　　 本文利用Luminuol.還原

4、HAuCl4法制備了LumAuNPs納米復(fù)合粒子。討論了反應(yīng)物的用量對LumAuNPs復(fù)合粒子顆粒大小的影響。TEM結(jié)果表明，該方法制得的納米粒子分散性好，粒徑均一，且具有良好的化學(xué)發(fā)光性質(zhì)。綜合LumAuNPs復(fù)合粒子的紫外可見、熒光及化學(xué)發(fā)光性質(zhì)，確定了Luminol-H2O2-HRP-F化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移體系中制備LumAuNPs復(fù)合粒子的最佳反應(yīng)物的條件為：0.02％的HAuCl4溶液100 mL，0.01 mol/L Lum

5、inol溶液1.8 mL。
　　 三、基于化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移體系構(gòu)建的新型雙螺旋分子信標(biāo)探針用于DNA檢測的研究
　　 基于Luminol-H2O2-HRP-F化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移體系，構(gòu)建了化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移雙螺旋分子信標(biāo)探針（CRET-BMBP）用于 DNA的檢測。其中，CRET-BMBP檢測 DNA的線性范圍為1.0×10-9～1.0×10-8mol·L-1，線性回歸方程為y=11.57679+60.09556

6、 x，線性相關(guān)系數(shù)R=0.99935，并且我們引入了Au@Fe3O4復(fù)合粒子來降低信號背景值改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法，此時，DNA的線性范圍為1.0×10-10～1.0×10-9mol·L-1，線性回歸方程為y=9.69283+73.61775 x，線性相關(guān)系數(shù)R=0.99975。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對該檢測方法的選擇性進(jìn)行了研究。
　　 四、基于化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移體系構(gòu)建的新型分子信標(biāo)適體探針用于癌細(xì)胞中ATP檢測的研究
　　 基

7、于Luminol-H2O2-HRP-F化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移體系，構(gòu)建了化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移雙螺旋分子信標(biāo)適體探針（CRET-BMBP）用丁二磷酸腺苷（ATP）的檢測。其中，CRET-BMBP檢測ATP線性范圍為1.0×10-6M～1.0×10-5M，線性回歸方程為I=56.0273 C+17.4505，檢測限為1.1×10-7M；在此基礎(chǔ)上討論了ATP與適體的反應(yīng)溫度以對ATP檢測的影響。將該體系成功地用于K562癌細(xì)胞和4T1癌細(xì)胞中