新型化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移體系在HCG免疫分析中的應(yīng)用研究.pdf

1、人絨毛膜促性腺激素（Human Chorionic Gonadotropin,HCG）是一種由胎盤(pán)絨毛膜囊泡的滋養(yǎng)細(xì)胞分泌的肽激素。血清HCG的定量檢測(cè)不僅可用于確診懷孕、評(píng)估懷孕進(jìn)程、篩選異位妊娠、葡萄胎和唐氏綜合征等許多妊娠疾病；還可用于診斷前列腺癌、生殖細(xì)胞腫瘤、滋養(yǎng)層癌、絨毛膜癌等疾病。因此，測(cè)定血清中HCG對(duì)于臨床診斷和預(yù)后均有極其重要的意義。同時(shí)，唾液樣本作為一種新型的診斷介質(zhì)正引起諸多學(xué)者的廣泛關(guān)注。唾液樣本的采集安全方便

2、，無(wú)創(chuàng)傷，無(wú)痛苦，無(wú)傳播血源性疾病的危險(xiǎn)，更容易被患者接受。然而，唾液樣本中HCG的含量極低，因此，建立快速、簡(jiǎn)便、高特異性和靈敏性的HCG檢測(cè)方法具有重要的意義。傳統(tǒng)的免疫分析法具有較低的特異性和靈敏性、分析時(shí)間長(zhǎng)、成本高、線性范圍窄等缺點(diǎn)，限制其實(shí)際應(yīng)用。為了實(shí)現(xiàn)血清和唾液樣本中HCG快速檢測(cè)的目的，基于化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移體系，建立兩種新型快速、靈敏、特異性的檢測(cè)痕量HCG的化學(xué)發(fā)光免疫分析法。
　　本文主要從以下兩個(gè)部分展

3、開(kāi)論述：
　　第一部分：納米金增強(qiáng)的新型化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)用于血清中HCG檢測(cè)的研究
　　目的：以經(jīng)典的熒光探針-異硫氰酸熒光素作為受體，基于納米金增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移體系建立一種快速、靈敏、特異性測(cè)定血清中HCG的免疫分析法。
　　方法：采用魯米諾還原氯金酸的方法制備得到金納米顆粒，研究其對(duì)魯米諾-過(guò)氧化氫-辣根過(guò)氧化物酶化學(xué)發(fā)光體系的增強(qiáng)作用，基于磁性微球的磁性分離特性、金納米顆粒的放大作用和化學(xué)發(fā)光共

4、振能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象的高靈敏性構(gòu)建一種化學(xué)發(fā)光免疫傳感器，并將此傳感器用于血清樣本中HCG的快速檢測(cè)。
　　結(jié)果：其最佳條件為：異硫氰酸熒光素標(biāo)記的HCG抗體(10μg mL-1)量為0.7 mL，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗體（1μg mL-1）量為0.3 mL，PBS緩沖液的（pH=9）、發(fā)光底物魯米諾、氧化劑H2O2和發(fā)光增強(qiáng)劑對(duì)碘苯酚的濃度分別為10 mmol L-1、10 mmol L-1、3.5 mmol L-1和1.25 mmo

5、l L-1。在最佳條件下，其線性范圍為0.15-5 mIU mL-1，檢出限為0.15 mIU mL-1，相關(guān)系數(shù)為0.992，加標(biāo)回收率范圍是92.3％-107.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于7.9%。此外，為了驗(yàn)證該方法的實(shí)用性，將血清中HCG的檢測(cè)結(jié)果與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，兩種方法具有較好的一致性。
　　結(jié)論：該免疫分析法可用于血清樣品中HCG的測(cè)定，具有良好的實(shí)際應(yīng)用前景。
　　第二部分：石墨烯為受體的新型化

6、學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)用于血清和唾液中痕量HCG檢測(cè)的研究
　　目的：功能石墨烯作為新型能量猝滅受體，利用化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)，構(gòu)建一種免疫傳感器，實(shí)現(xiàn)血清和唾液樣本中痕量HCG的快速、靈敏檢測(cè)。
　　方法：以功能石墨烯為受體，磁性微球表面接枝辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗-HCG抗體作為供體?；谝环N抗原和多種抗體特異性結(jié)合的原理，將辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗-HCG抗體、HCG和抗-HCG抗體（功能石墨烯表面）一同孵育進(jìn)行免疫反

7、應(yīng)，形成夾心式免疫復(fù)合物。縮小供體與受體間的距離，促使它們之間產(chǎn)生能量轉(zhuǎn)移，進(jìn)而引起發(fā)光強(qiáng)度的變化，實(shí)現(xiàn)HCG快速、靈敏的檢測(cè)。
　　結(jié)果：與常規(guī)的小分子能量受體相比，功能石墨烯憑借高比表面積和快速電子傳遞能力的特性，顯示出更高的能量轉(zhuǎn)移效率和發(fā)光猝滅能力。最佳條件為：固定于磁性微球上的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗-HCG抗體（1.0μg mL-1）量為0.3 mL，抗-HCG抗體的濃度和PBS緩沖液（pH=9）的濃度分別為1μg mL

8、-1和0.01 mol L-1。發(fā)光底物魯米諾（10 mmol L-1）的體積為30μL，氧化劑H2O2的濃度為3.5 mmol L-1。最佳條件下，在0.1 mIU mL-1-10 mIU mL-1范圍內(nèi)，HCG濃度與發(fā)光強(qiáng)度成線性關(guān)系，檢出限為0.06 mIU mL-1。將該方法用于血清和唾液樣品中 HCG的檢測(cè)，加標(biāo)回收率為92.3%-112.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.7%-7.9%，且唾液樣品中HCG的檢出范圍為0.3mIU mL