microRNA-140在乳腺癌細(xì)胞中對(duì)Nrf2及其下游抗氧化基因的表達(dá)調(diào)控.pdf

1、Nrf2基因?qū)儆谵D(zhuǎn)錄因子CNC家族，含有堿性亮氨酸拉鏈(bZIP)結(jié)構(gòu)，是細(xì)胞抗氧化反應(yīng)中的重要轉(zhuǎn)錄因子。它通過(guò)與其下游基因啟動(dòng)子區(qū)的抗氧化反應(yīng)元件ARE結(jié)合，誘導(dǎo)抗氧化蛋白和Ⅱ相解毒酶的表達(dá)，在氧化應(yīng)激和外源性有毒物質(zhì)損傷的防御機(jī)制中發(fā)揮重要的作用。Nrf2/ARE信號(hào)通路是近幾年抗氧化研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)，該通路在抗腫瘤、抗應(yīng)激、抗凋亡、抗炎癥反應(yīng)、抗動(dòng)脈粥樣硬化以及神經(jīng)保護(hù)等方面發(fā)揮著廣泛的細(xì)胞保護(hù)功能。目前Nrf2/ARE通路已經(jīng)成為

2、抗癌化學(xué)療法的新靶點(diǎn)，為癌癥的治療提供一條新途徑。
　　MicroRNAs(miRNAs)是一種長(zhǎng)度約18-24個(gè)堿基大小的內(nèi)源性非編碼單鏈小分子RNA，它通過(guò)與靶mRNA的3'UTR堿基配對(duì)，通過(guò)抑制mRNA的翻譯或直接使其降解，調(diào)控基因的表達(dá)。miRNA參與動(dòng)植物許多復(fù)雜的生命過(guò)程，如生長(zhǎng)發(fā)育、器官形成、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞增殖。目前的研究表明，miRNA在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用，多數(shù)miRNA基因位于與腫瘤形成相關(guān)性

3、脆弱基因位點(diǎn)。miRNA的異常表達(dá)與多種癌癥的發(fā)生密切相關(guān)，并且作為癌基因和抑癌基因參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移等。
　　目的本研究旨在揭示microRNA在乳腺癌細(xì)胞中對(duì)Nrf2及其下游基因表達(dá)的影響，并且探究miR-140對(duì)乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)以及氧化應(yīng)激的影響。
　　方法我們首先利用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)miR-140與Nrf2的結(jié)合位點(diǎn)，然后采用雙熒光報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)miR-140對(duì)Nrf23'UTR及啟動(dòng)子上的8×A

4、RE熒光素酶報(bào)告基因活性的影響;同時(shí)以實(shí)時(shí)熒光定量PCR法和Western Bloting法檢測(cè)過(guò)表達(dá)miR-140和加藥刺激前后細(xì)胞中Nrf2及其下游基因的mRNA和蛋白的表達(dá)變化;最后，MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染miR-140后，對(duì)于不同濃度H2O2處理的細(xì)胞，其生長(zhǎng)能力及對(duì)氧化應(yīng)激敏感性的變化。
　　結(jié)果生物信息學(xué)結(jié)果顯示，miR-140與Nrf23'UTR具有保守的相互結(jié)合區(qū)域，過(guò)表達(dá)miR-140能夠顯著抑制Nrf23'UTR和A