結締組織生長因子對胃癌細胞增殖、侵襲遷移的影響及其作用機制的研究.pdf

1、目的:構建CTGF真核表達載體pcDNA3.1-CTGF及其陰性對照pcDNA3.1-EGFP，轉染相對低表達CTGF的胃癌細胞，觀察上調CTGF表達水平對胃癌細胞增殖及侵襲遷移的影響，并利用表達譜芯片分析差共同的差異表達基因。
　　方法:提取胃癌細胞(AGS、SGC-7901、MKN-45和BGC-823)總RNA，利用PCR技術檢測胃癌細胞系CTGFmRNA表達水平差異。構建pcDNA3.1-CTGF表達載體，運用細胞轉染技術

2、對相對低表達CTGF的胃癌細胞轉染經測序鑒定后的pcDNA3.1-CTGF和pcDNA3.1-EGFPD表達載體，轉染pcDNA3.1-CTGF質粒的作為實驗組，轉染pcDNA3.1-EGFP的細胞作為陰性對照，轉染后細胞經過G418篩選，Q-PCR, western blot鑒定，選擇CTGF表達最高的實驗組和表達最低的陰性對照組，通過MTT、trans-well實驗，分析轉染pcDNA3.1-CTGF后胃癌細胞增殖、侵襲及遷移能力的

3、變化。利用安捷倫表達譜芯片分析轉染pcDNA3.1-CTGF前后基因表達變化并進行差異聚類分析，并對差異明顯基因進行PCR檢測驗證。
　　結果:1.胃癌細胞系CTGF mRNA相對表達水平BGC-823＞SGC-7901＞AGS＞MKN-45
　　2.成功構建了pcDNA3.1-CTGF真核表達載體及陰性表達載體pcDNA3.1-EGFP。
　　3.通過重組質粒DNA轉染、RT-qPCR檢測，成功獲得CTGF表達水平最

4、高的實驗組(MKN45-CTGF、AGS-CTGF、SGC7901-CTGF)和表達最低的Negative control組(MKN45-EGFP、AGS-EGFP、 SGC7901-EGFP)細胞。
　　4.MTT實驗顯示，72h后，實驗組相對增殖率分別是對應Negative control的1.37、1.47、1.64倍。遷移實驗表明，24小時后實驗組穿過膜的細胞數(shù)達到140.7±17.2、132.7±12.0、146.0±1

5、3.9個;Negative control組穿過膜的細胞數(shù)為74.3±9.6、83.0±8.0、93.3±11.5個;實驗組細胞穿膜個數(shù)分別是Negative control穿膜個數(shù)的1.89、1.60、1.57倍。侵襲實驗顯示，48小時后實驗組穿過膜的細胞數(shù)達到87.3±t2.7、70.7±19.1、69.3±11.7個;Negative control組穿過膜的細胞數(shù)為54.7±8.1、35.0±11.5、37.3±4.0個;實驗組

6、細胞穿膜個數(shù)分別是Negative control穿膜個數(shù)的1.60/2.02/1.86倍。
　　5.表達譜芯片結果顯示實驗組各細胞VASP基因表達水平均明顯增高，標準化后的VASP基因表達水平分別是Negative control的2.242、3.907、3.151倍。PCR檢測顯示實驗組VASPmRNA表達水平分別是Negative control的2.09、3.23、3.84;是Normal control的18.2、9.3