GRASP65的表達對胃癌細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響及機制.pdf

1、目的：
　　探討高爾基體堆疊蛋白65（Golgi reassembly stacking protein65，GRASP65）在體外對人類來源的胃癌細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲能力的影響及其機制。
　　方法：
　　首先，通過Western Blot和RT-qRCR鑒別低、中、高分化（MKN-45、SGC-7901、MKN-28）和正常胃黏膜細胞GES-1中GRASP65蛋白質和mRNA的表達量。然后，用特異性siRNA片

2、段和質粒通過Lipofectamine2000進行瞬時轉染，分別下調和上調MKN-45和MKN-28中GRASP65的表達量。用RT-qPCR和Western Blot試驗檢測轉染前后GRASP65的mRNA和蛋白表達量用以證實轉染成功。實驗分為上調和下調兩部分，又各自分為實驗組（GRASP65 siRNA組/GRASP65 plasmid組）、陰性對照組（Control siRNA組/Empty vector組）和空白對照組（MKN-

3、45/MKN-28）3組。最后，用細胞計數試劑盒-8（CCK-8）、流式細胞術（FCM）、Transwell遷移和侵襲實驗等實驗技術檢測轉染前后各組胃癌細胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲能力，以及Western Blot檢測轉染前后各組細胞GM130、MMP-9和MMP-2的蛋白質表達量。
　　結果：
　　Western Blot和 RT-qRCR結果顯示MKN-45細胞和SGC-7901細胞中GRASP65的蛋白和mRNA表達量

4、均明顯高于MKN-28細胞和GES-1細胞中GRASP65的蛋白和mRNA表達量（P＜0.05）,故選擇MKN-45和MKN-28作為實驗對象，分別下調和上調GRASP65的表達量。RT-qPCR和Western Blot結果證明瞬時轉染成功，用特異性片段轉染過的細胞GRASP65的mRNA和蛋白表達量與另外兩個對照組對比有顯著差異（P＜0.05）。CCK-8、流式細胞術、Transwell遷移和侵襲實驗均證明，下調GRASP65的表達