IL-18，Il-33對Th1,Th2細胞因子的表達調(diào)控在原發(fā)免疫性血小板減少癥發(fā)病中的作用.pdf

1、第一部分細胞因子定量蛋白芯片技術分析原發(fā)免疫性血小板減少癥(ITP)患者血清細胞因子水平
　　研究目的和背景:原發(fā)免疫性血小板減少癥(ITP)是一個以自身免疫為主的疾病:主要特征為抗體介導的血小板破壞，巨核細胞血小板生成不足，T細胞功能失調(diào)等。我們研究的主要目的是對ITP患者血清的細胞因子水平做全面的評估和檢測，并且就ITP不同病程如初發(fā)、緩解、復發(fā)的情況跟蹤細胞因子的變化。
　　材料和方法:我們的標本來自10位健康人作為對

2、照（作為“Control”組），共23位ITP患者，其中17位未經(jīng)治療前（作為“New ITP”組），這17位患者經(jīng)過地塞米松治療后均獲得完全緩解（作為“Response”組），這17位患者中的4位患者與另外6位患者治療緩解后復發(fā)（作為“Relapse”組）。應用細胞因子定量蛋白芯片ELISA技術檢測血清中各細胞因子的水平。
　　結(jié)果:與正常人相比，Th2相關的細胞因子IL-5、IL-6、IL-10、IL-13等在初發(fā)和復發(fā)的IT

3、P患者中顯著降低，而Thl相關的細胞因子IFN-γ、TNF-α顯著降低而IL-2在ITP患者中沒有明顯變化。經(jīng)過地塞米松治療緩解后，Th1相關細胞因子IL-2、IFN-γ、 TNF-α和Th2相關細胞因子IL-5、IL-6、IL-10，均不同程度地較患者各自治療前的水平明顯上升。
　　結(jié)論:我們細胞因子定量蛋白芯片結(jié)果顯示:初發(fā)ITP患者的Th1相關細胞因子顯著降低，Th2相關細胞因子也顯著降低。經(jīng)過治療后完全緩解的ITP患者Th

4、1、Th2相關細胞因子較治療前均有不同程度的回升。
　　第二部分 IL-18，IL-33通過T-bet，GATA3調(diào)節(jié)CD4+T細胞功能和細胞因子的分泌在原發(fā)免疫性血小板減少癥(ITP)發(fā)病中的作用
　　研究目的和背景:為了檢測Th1，Th2失衡在原發(fā)免疫性血小板減少癥(ITP)當中的作用，我們進行了CD4+T細胞的體外培養(yǎng)，觀察其在ITP患者中功能的改變以及地塞米松治療后的變化;以及探索白介素-18(IL-18)和白介素-

5、33（IL-33）的功能和信號轉(zhuǎn)導在ITP發(fā)病機制中的作用。
　　材料和方法:我們采集了共15個樣本來自5位健康人作為對照（作為“Control”組），采集了9個樣本來自3位初發(fā)ITP患者（作為“New ITP”組），而另外采集了9個樣本來自于3位經(jīng)過地塞米松治療后完全緩解的患者（作為“Response”組），每位受試者分別采集三個樣本。將其外周血進行分離，磁珠分選純化后，培養(yǎng)CD4+T細胞，每個受試者的三個樣本隨機分組，分別給予

6、10ng/mL的IL-18、100ng/mL的IL-33和不加刺激的不同條件下培養(yǎng)4天。在第0、1、4天搜集細胞，并用流式細胞儀檢測其CD4，IL-13，T-bet，GATA3等指標。細胞的mRNA采集自第0、1、3、4天，運用qRT-PCR的方法檢測E4BP4，IL-5，IL-10，IL-18Ra，GATA3，ST2L，和T-bet的值。于第0、1、3、4天搜集細胞培養(yǎng)的上清液并且用流式細胞珠子陣列分析(CBA)方法檢測IL-5，IL

7、-10，IL-13，TNF-α，和IFN-γ的水平。
　　結(jié)果:體外CD4+T細胞培養(yǎng)研究顯示初發(fā)和緩解ITP患者在研究各時點均有細胞內(nèi)流式T-bet水平的高表達，IL-13和GATA3在第0和第1天時高表達，但第4天時低表達。細胞內(nèi)mRNA的E4BP4，T-bet，IL-10的表達有明顯升高，同樣也觀察到了緩解組中IL-10，GATA3，ST2L的明顯升高。初發(fā)和緩解ITP患者，細胞外CBA檢測IL-5，IL-10，IL-13，

8、TNF-α和IFN-γ的水平在各個時點與正常對照相比均明顯減低。而對于加入IL-18，IL-33或不加刺激的各組，上述的細胞內(nèi)流式檢測、mRNA、細胞外游離細胞因子均沒有顯著性差異?？傮w上經(jīng)過地塞米松治療緩解的患者在細胞因子的表達和分泌的過程中與初發(fā)ITP患者相比沒有顯著性差異。
　　結(jié)論:ITP患者Th1、Th2相關細胞外游離細胞因子IL-5、IL-10、IL-13、TNF-α、IFN-γ濃度降低與定量蛋白芯片的結(jié)果相吻合;IT

9、P患者細胞內(nèi)Th1相關細胞因子T-bet高表達，細胞內(nèi)Th2相關細胞因子GATA3與IL-13表達在培養(yǎng)早期升高培養(yǎng)后期減低，為我們揭示了ITP發(fā)病可能存在新的原因:即Th1/Th2相關細胞因子可能在轉(zhuǎn)錄后調(diào)控、翻譯后調(diào)控和蛋白表達分泌等多層次多級別有調(diào)控。體外培養(yǎng)經(jīng)過IL-18和IL-33的刺激并未觀察到健康人或ITP患者的CD4+T細胞功能對于其刺激的顯著性差異，我們認為和IL-18，IL-33主要在Th0細胞分化前期而非已經(jīng)定向分