Th1-Th17-Th9細(xì)胞亞群在原發(fā)免疫性血小板減少癥發(fā)病中的相關(guān)性及意義.pdf

1、原發(fā)免疫性血小板減少癥(primary immune thrombocytopenic，ITP)是一組免疫介導(dǎo)的血小板過度破壞所致的出血性疾病。臨床主要表現(xiàn)為自身免疫性小板減少，伴或不伴皮膚黏膜出血。大量研究表明，ITP是一種異質(zhì)性疾病，血小板自身抗原免疫失耐受致使血小板特異性抗體介導(dǎo)的血小板破壞，細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)介導(dǎo)的血小板溶解，以及巨核細(xì)胞凋亡障礙引起的血小板生成不良都是其發(fā)病的重要機(jī)制。近年來，Th細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫逐漸成

2、為ITP發(fā)病機(jī)制研究的熱點(diǎn)。Th1細(xì)胞可以活化巨噬細(xì)胞，分泌干擾素-γ(IFN-γ)、IL-2等細(xì)胞因子。目前認(rèn)為，Th1細(xì)胞在ITP發(fā)病機(jī)制中為優(yōu)勢(shì)反應(yīng)細(xì)胞，其與Th2細(xì)胞的失衡可是ITP發(fā)病的重要原因之一。Th17細(xì)胞是近年來新發(fā)現(xiàn)的輔助性T淋巴細(xì)胞亞群。研究發(fā)現(xiàn)，Th17細(xì)胞在多種自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用。其中，Th17比例在ITP病人體內(nèi)顯著升高被大量證實(shí)。Th17細(xì)胞亞群分泌的細(xì)胞因子IL-17亦與ITP的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。近

3、來，一系列研究發(fā)現(xiàn)，一個(gè)特定的T細(xì)胞亞群可直接分泌IL-9,即Th9細(xì)胞。IL-9被認(rèn)為是調(diào)節(jié)自身免疫性疾病的炎癥和高反應(yīng)性的一種新的治療靶向，而Th9的異?；罨爱惓７置贗L-9可能與ITP的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。IL-9的產(chǎn)生被多種細(xì)胞因子及轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控，包括PU.1（由Spil編碼），STAT6,Batf，GATA-3和IRF4等。其中PU.1是ETS家族中最重要的轉(zhuǎn)錄因子，可直接與Il9啟動(dòng)子結(jié)合，并與組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶GCN5形成復(fù)合

4、物，從而活化Il9啟動(dòng)子。與Th9的表型相關(guān)聯(lián)的組蛋白修飾已被證明依賴于PU.1,這表明PU.1可能通過調(diào)控Th9的分化參與ITP的發(fā)生發(fā)展。
　　目的:
　　本研究擬通過檢測(cè)ITP患者外周血的Th1/Th17/Th9細(xì)胞亞群比例及各細(xì)胞因子含量，通過比較Th1/Th17/Th9細(xì)胞亞群在ITP發(fā)病中的相關(guān)性，進(jìn)一步探討Th9細(xì)胞在ITP發(fā)病機(jī)制中的意義，并明確PU.1在IL-9產(chǎn)生中的作用。
　　方法:
　　(

5、1)實(shí)驗(yàn)組及正常對(duì)照組:本實(shí)驗(yàn)共選取2014年3月至2015年1月在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院血液科門診及新住院新確診的ITP患者34例，其中男性患者15例，女性患者19例，年齡為18～56歲。其診斷均滿足美國(guó)血液病協(xié)會(huì)2011年自身免疫性血小板減少癥循證實(shí)踐指南診斷，且未經(jīng)藥物及輸血治療。同時(shí)隨機(jī)選入34例健康者設(shè)為正常對(duì)照組，其中男性13例，女性21例，年齡為26～63歲。所有受試者均無自身免疫性疾病、高血壓、糖尿病、心血管疾病、妊娠、惡性腫

6、瘤等其他疾病，且一個(gè)月內(nèi)未使用糖皮質(zhì)激素等免疫抑制劑。
　　(2)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ITP患者和正常對(duì)照組外周血中Th1、Th17和Th9細(xì)胞亞群比例。三種細(xì)胞分別標(biāo)記為:Th1細(xì)胞為CD3+CD8--IFN-γ+，Th9細(xì)胞為CD3+CD8--IL-9+，Th17細(xì)胞為CD3+ CD8--IL-17+;
　　(3)應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(ELISA)檢測(cè)ITP患者以及正常對(duì)照組血漿中細(xì)胞因子IFN-γ、IL-17和IL-9的

7、濃度;
　　(4)應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)IL-9 mRNA和PU.1 mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　(1) ITP患者外周血Th1細(xì)胞比例（18.23±2.48％）明顯高于正常對(duì)照組(12.46±2.72％)(p＜0.05)。
　　(2) ITP患者外周血Th17細(xì)胞比例（1.84±0.43％）較正常對(duì)照組（1.21±0.38％）亦升高(p＜0.05)。
　　(3) ITP患者

8、外周血Th9細(xì)胞比例（1.13±0.32％）高于正常對(duì)照組（0.29±0.08％）(p＜0.05)。
　　(4) ITP患者血漿中IFN-γ表達(dá)水平（32.52±10.28pg/ml）較正常對(duì)照組(17.83±8.02pg/ml)顯著升高，ITP患者血漿和正常對(duì)照組血漿中IL-17、IL-9表達(dá)水平均低于ELISA試劑盒最低檢測(cè)濃度，無法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　(5) IL-9 mRNA在ITP患者外周血中表達(dá)水平比正常對(duì)照組

9、明顯升高，PU.1 mRNA表達(dá)亦明顯升高，兩者呈正相關(guān)性;
　　(6) ITP患者外周血中Th9細(xì)胞亞群和Th17細(xì)胞亞群呈正相關(guān)(r=0.5614,p=0.0192)。
　　(7)在ITP患者外周血中，Th9細(xì)胞亞群與Th1細(xì)胞亞群呈正相關(guān)性(r=0.4640，p=0.0258)，同時(shí)Th17細(xì)胞亞群與Th1細(xì)胞亞群亦呈明顯正相關(guān)(r=0.6213,p=0.0087)。
　　結(jié)論:Th1細(xì)胞在ITP免疫應(yīng)答反應(yīng)中呈