2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、目的:通過體內(nèi)和體外兩種模型,評(píng)價(jià)金線蓮水提物(Water Extract of Anoectochilus roxburghii,WEAR)及主要成分金線蓮苷(Kinsenoside,Kd)對(duì)免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)的治療作用,并進(jìn)一步探討其作用機(jī)制。
  方法:(1)體外誘導(dǎo)脾細(xì)胞實(shí)驗(yàn):分離培養(yǎng)小鼠原代脾細(xì)胞,加入5μg/mLConA溶液誘導(dǎo)其增殖分裂,1h后分別給予WEAR(320*、3

2、20、160、l80、40、20、10、5μg/mL)和Kd(32*、32、16、8、4、2、1、0.5μg/mL)繼續(xù)培養(yǎng)24h,測(cè)定細(xì)胞上清液TNF-α,IFN-γ和IL-4的含量。其中320*μg/mL和32*μg/mL組以分別考察WEAR和Kd自身對(duì)細(xì)胞的影響。陽性對(duì)照選擇水飛薊素(Silymarin)50μg/mL。
 ?。?)體內(nèi)ConA誘導(dǎo)小鼠自身免疫性肝炎實(shí)驗(yàn):健康雄性Balb/c小鼠隨機(jī)分為12組,每組10只,連

3、續(xù)給藥一周,WEAR口服給予40,20,10mg/10g(b.w.)三個(gè)劑量,Kd口服給予10,5,2.5mg/10g(b.w.)三個(gè)劑量。陰性對(duì)照分別為兩種藥物高劑量,以排除藥物本身可能造成的陽性結(jié)果。陽性藥為地塞米松(Dexamethasone,DEXA)0.009mg/10g和水飛薊素(Silymarin)0.5mg/10g,正常組和模型組給予等量的蒸餾水。末次給藥1h后尾靜脈注射0.2mg/10g的ConA溶液,并于6h、24h

4、分批處死小鼠。檢測(cè)小鼠血漿肝功能水平(AST和ALT)、蘇木精伊紅染色(HE)切片觀察組織病理學(xué)變化、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定血漿中TNF-α,IFN-γ,IL-4,IL-6以及IL-10的水平;TUNEL法測(cè)定肝細(xì)胞凋亡指數(shù);免疫組化法測(cè)定肝內(nèi)CD4+T和CD8+T細(xì)胞的浸潤(rùn),綜合評(píng)價(jià)WEAR和Kd的保肝效果。
  結(jié)果:(1)體外脾細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果顯示,WEAR(80~320μg/mL)和Kd(8~32μg/mL)可呈現(xiàn)劑

5、量依賴性的降低細(xì)胞懸液中TNF-α,IFN-γ和IL-4的含量,其中WEAR(320μg/mL、160μg/mL)和Kd(32μg/mL)作用最為明顯(P<0.05)。
 ?。?)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)采用尾靜脈注射 ConA24h后測(cè)定血漿轉(zhuǎn)氨酶時(shí)發(fā)現(xiàn),WEAR和Kd的高、中劑量可顯著的降低血漿轉(zhuǎn)氨酶(P<0.05),且高劑量的WEAR與地塞米松的治療效果相當(dāng);ELISA測(cè)定血漿中細(xì)胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-4,IL-6以及IL-1

6、0含量時(shí)發(fā)現(xiàn),模型組各細(xì)胞因子均顯著性升高,而給藥組能降低各炎癥因子的含量,尤其以WEAR高、中劑量和Kd高劑量尤為顯著。肝臟HE切片顯示,WEAR和Kd能減少炎癥因子的浸潤(rùn)和增強(qiáng)對(duì)肝實(shí)質(zhì)的保護(hù);TUNEL切片也能看出,WEAR和Kd可明顯抑制肝細(xì)胞的凋亡;從CD4+T和CD8+T細(xì)胞的免疫組化分析,WEAR和Kd可劑量依賴性的降低肝內(nèi)淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)。
  結(jié)論:(1)體外WEAR和Kd可通過抑制脾細(xì)胞對(duì)炎癥因子的釋放,發(fā)揮免疫調(diào)

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