吲哚-2,3-二酮抗動脈粥樣硬化機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究吲哚-2，3-二酮對動脈粥樣硬化的預(yù)防作用，并初步探討其作用機(jī)制。
　　 方法：建立大鼠乳鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞(rCMEC)的組織貼塊培養(yǎng)法，形態(tài)學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定為rCMEC。在掌握其生長特性后，選用生長狀態(tài)良好的第3代細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實驗。用不同濃度的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)作用于細(xì)胞，MTT法觀察細(xì)胞的存活率以確定ox-LDL的造模濃度。吲哚-2，3-二酮預(yù)處理后，MTT法測定其對ox-LDL誘導(dǎo)微血管

2、內(nèi)皮細(xì)胞損傷的影響，對ox-LDL誘導(dǎo)微血管內(nèi)皮細(xì)胞與單核細(xì)胞黏附的影響;ELISA法分別測定其對ox-LDL致心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的炎性因子白介素-6（IL-6）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的影響，并從基因水平觀察二者表達(dá)的情況。
　　 結(jié)果：免疫細(xì)胞化學(xué)染色法鑒定所培養(yǎng)的乳鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞因子CD31相關(guān)抗原陽性，細(xì)胞呈單層鋪路石樣生長;MTT法結(jié)果顯示濃度為0.1g·L-1的ox-LDL對內(nèi)皮細(xì)胞損傷作用較明顯,

3、可建立穩(wěn)定的內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型，被選為造模濃度;吲哚-2，3-二酮預(yù)處理后，0.1g·L-1的ox-LDL能夠明顯降低內(nèi)皮細(xì)胞存活率，使模型組細(xì)胞吸光值明顯下降，與對照組相比差異顯著(P＜0.05)，與模型組相比，吲哚-2，3-二酮各實驗組吸光度值都升高（P＜0.05），并有劑量依賴關(guān)系;吲哚-2，3-二酮高、中、低劑量組均能明顯抑制ox-LDL引起的單核細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，與模型組相比差異顯著（P＜0.05），且隨著濃度升高，這種抑制

4、作用越來越強(qiáng);吲哚-2，3-—二酮高、中、低劑量組均能明顯抑制ox-LDL引起的內(nèi)皮細(xì)胞分泌IL-6、TNF-α，與模型組相比差異顯著(P＜0.05);實時熒光定量PCR(RT-PCR)結(jié)果顯示:與對照組相比，模型組IL-6、TNF-α mRNA表達(dá)均明顯上升（P＜0.05）;與模型組相比，吲哚-2，3-二酮高、中、低劑量組IL-6、TNF-α mRNA表達(dá)均明顯下降（P＜0.05）。
　　 結(jié)論：吲哚-2，3-二酮對動脈粥樣硬