Pokemon調(diào)控Bim轉(zhuǎn)錄表達(dá)促進大腸癌的發(fā)生發(fā)展.pdf

1、[目的]
　　 1觀察Pokemon和Bim在大腸慢性炎、大腸腺瘤、大腸癌組織中的表達(dá)及其關(guān)系。
　　 2明確Pokemon在大腸癌細(xì)胞LOVO和HCT116中對Bim基因表達(dá)的影響。
　　 3探討在大腸癌細(xì)胞中改變Pokemon表達(dá)聯(lián)合化學(xué)藥物順鉑（Dichlorodiamineplatinum，DDP）處理應(yīng)用對Bim表達(dá)的影響。
　　 [方法]
　　 1免疫組織化學(xué)方法檢測大腸慢性炎、大腸腺

2、瘤和大腸癌組織中Pokemon，Bim的表達(dá)情況。統(tǒng)計分析二者表達(dá)的相關(guān)性。
　　 2用脂質(zhì)體法將Pokemon表達(dá)質(zhì)粒以及陰性對照質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染HCT116細(xì)胞（Pokemon不表達(dá)），分別為Pokemon過表達(dá)細(xì)胞(Overexpression Pokemon，OP細(xì)胞)和陰性對照細(xì)胞(Negative Control，NC細(xì)胞)。用小分子RNA穩(wěn)定敲減LOVO細(xì)胞(Pokemon高表達(dá))的Pokemon，建立Pokemon敲

3、減細(xì)胞株(Knockdown，KD細(xì)胞)和陰性對照細(xì)胞株(Negative Control，NC細(xì)胞)。用qRT-PCR和Western blot分別檢測這些細(xì)胞的Pokemon和Bim的mRNA和蛋白水平。
　　 3給LOVO-NC、KD及HCT116-NC、OP細(xì)胞加入化學(xué)抗癌藥物順鉑后，用qRT-PCR和Western blot檢測這些細(xì)胞的Bim mRNA和蛋白水平。
　　 [結(jié)果]
　　 1在大腸病變組

4、織中，Pokemon和Bim的表達(dá)情況及相關(guān)性:
　　 (1) Pokemon蛋白在大腸慢性炎，大腸腺瘤，大腸癌組織中陽性表達(dá)率分別為23.5％、44％、81.7％，三者比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);
　　 (2) Bim蛋白在大腸慢性炎，大腸腺瘤，大腸癌組織中陽性表達(dá)率分別為96.1％、70％、32.7％，三者比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);
　　 (3)低分化腺癌的Pokemon陽性表達(dá)率為100％，比

5、高分化腺癌的63.6％顯著升高，而Pokemon陽性表達(dá)率與性別、年齡、腫瘤部位、Dukes分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān);高分化腺癌的Bim陽性表達(dá)率為40.9％，比低分化腺癌的23.1％顯著升高，直腸癌的Bim陽性表達(dá)率為43.5％，比結(jié)腸癌的24.1％顯著升高，而Bim陽性表達(dá)率與性別、年齡、Dukes分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān);
　　 (4)根據(jù)Spearman等級相關(guān)分析結(jié)果:不同大腸病變組織Pokemon蛋白表達(dá)

6、與Bim蛋白表達(dá)之間呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r=-0.426(P＜0.01)。
　　 2 Pokemon-KD細(xì)胞與Pokemon-NC細(xì)胞相比，Pokemon mRNA下調(diào)了70％，蛋白表達(dá)量下降62.2％; Bim mRNA表達(dá)量增高76％，蛋白水平變化不夠明顯。在Pokemon過表達(dá)的HCT116細(xì)胞，Bim mRNA水平下調(diào)79.8，而蛋白水平變化不夠明顯。
　　 3在LOVO細(xì)胞中，Pokemon-KD聯(lián)合順鉑處理與

7、順鉑單獨處理相比，Bim mRNA表達(dá)量提高了51.8％，蛋白表達(dá)量提高了50％;在HCT116細(xì)胞中，Pokemon-OP聯(lián)合順鉑處理與順鉑單獨處理相比，Bim mRNA表達(dá)量下調(diào)了67.1％，蛋白表達(dá)量下調(diào)了64％。
　　 [結(jié)論]
　　 1 Pokemon和Bim的表達(dá)從大腸炎癥、腺瘤到大腸癌組織中分別顯著增高和顯著降低，表明兩者的表達(dá)與大腸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在大腸癌組織中Pokemon和Bim的表達(dá)呈高度負(fù)相

8、關(guān)，表明兩者具有拮抗或調(diào)控關(guān)系。
　　 2在大腸癌細(xì)胞中敲減或轉(zhuǎn)染Pokemon，Bim mRNA水平顯著升高或降低，但蛋白水平變化不明顯，表明Pokemon強力抑制Bim的轉(zhuǎn)錄但不太影響翻譯。
　　 3在大腸癌細(xì)胞中，在順鉑介入的情況下，Pokemon對Bim的mRNA穩(wěn)定水平的調(diào)控程度雖然有所降低，但使Bim出現(xiàn)了顯著的蛋白水平改變，表明在順鉑介入的情況下，Pokemon對Bim蛋白調(diào)控功能得以充分展現(xiàn)，而且敲減Po