柱前衍生化HPLC法測定齊墩果酸含量的研究.pdf

1、皂苷是一類重要的中藥活性成分，廣泛分布于植物界中，在抗菌、抗腫瘤、調(diào)節(jié)機(jī)體代謝、治療心血管疾病和糖尿病等方面都具有良好的應(yīng)用前景，是許多藥用植物如人參、黃芪、牛膝、遠(yuǎn)志的有效成分，故經(jīng)常作為指標(biāo)成分來評價(jià)中藥的質(zhì)量，但因皂苷類成分結(jié)構(gòu)特殊而且含量低，現(xiàn)有的測定方法很難滿足藥物質(zhì)量控制的要求，所以皂苷類成分的含量測定一直是中藥也是天然藥物分析的難題之一。
　　鑒于此，本課題采用柱前衍生化法對三萜類皂苷的代表—齊墩果酸的含量測定進(jìn)行了

2、研究，對衍生試劑、衍生反應(yīng)參數(shù)、衍生產(chǎn)物結(jié)構(gòu)進(jìn)行了系統(tǒng)深入的研究，在前期工作的基礎(chǔ)上成功建立了牛膝藥材中齊墩果酸的柱前衍生化測定法，并將其應(yīng)用到天麻膠囊中齊墩果酸的含量測定，取得滿意結(jié)果，為柱前衍生化用于皂苷類成分含量測定的后續(xù)研究奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
　　主要研究內(nèi)容和方法如下:
　　1.對齊墩果酸(OA)單體進(jìn)行了衍生反應(yīng)研究，采用對硝基苯甲酰氯(PNC)為衍生試劑，系統(tǒng)研究了衍生反應(yīng)參數(shù)，確定了最優(yōu)反應(yīng)條件為:投料比:m

3、PNC∶mOA≥15∶1(mg∶mg)，2.5∶1≤吡啶∶酰氯≤20∶1(ml∶g);反應(yīng)方式:超聲波加速;反應(yīng)時(shí)間:超聲65min后靜置2h。在此條件下齊墩果酸可完全轉(zhuǎn)化為衍生產(chǎn)物。
　　2.用HPLC法對衍生反應(yīng)進(jìn)行了精確表征，采用柱層析和半制備液相色譜精制分離得到衍生產(chǎn)物純品，用紫外、紅外、核磁、質(zhì)譜對產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征，證明齊墩果酸的衍生產(chǎn)物為對硝基苯甲酸齊墩果酸酯，以面積歸一化法測定，純度達(dá)99.1％。
　　3.以分

4、離精制得到的衍生物為對照品，建立了牛膝中齊墩果酸的柱前衍生化測定法。牛膝藥材樣品經(jīng)脫脂、提取、水解后以所建立的衍生方法進(jìn)行衍生，確定酰氯用量為:m牛膝∶m酰氯=10∶1(g∶g)，測定色譜條件為:色譜柱:Diamonsil（鉆石）C18柱(200mm×4.6mm，5μm);流動相:乙腈-0.2％磷酸(95∶5)，流速1mL/min，檢測波長:254nm，柱溫:室溫。結(jié)果齊墩果酸衍生物在2.0～6.0mg范圍內(nèi)線性良好，線性方程為y=85