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文檔簡介
1、高效液相色譜(HPLC)已經(jīng)成為糖類物質(zhì)分析的重要工具,但由于糖類物質(zhì)沒有紫外或熒光吸收,需對(duì)樣品進(jìn)行柱前衍生使它帶上紫外或熒光基團(tuán),從而可通過紫外或熒光檢測(cè)器對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。由于已有的各種衍生試劑都有衍生反應(yīng)難控制或質(zhì)譜檢測(cè)靈敏度不高的等局限性,不能很好地滿足當(dāng)前糖生物學(xué)分析的需要。因此,繼續(xù)研究開發(fā)新的高靈敏衍生化試劑及方法有著重要意義。 本論文重點(diǎn)研究了一種新型糖類物質(zhì)柱前衍生化方法,首次以3-氨基-9-乙基咔唑作為衍生化試
2、劑對(duì)糖類物質(zhì)進(jìn)行柱前衍生化HPLC分離和MALDI-TOF-MS分析。對(duì)反應(yīng)條件和色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化,對(duì)方法進(jìn)行了考察,并用該衍生化方法對(duì)不同生物樣品進(jìn)行了分析,取得了很好的效果。本研究主要取得了以下的研究成果和結(jié)論: 1.首次將AEC試劑用于標(biāo)準(zhǔn)單糖的柱前衍生化,利用HPLC和MALDI-TOF-MS分析對(duì)反應(yīng)結(jié)果進(jìn)行檢測(cè)和分析。對(duì)反應(yīng)條件進(jìn)行了優(yōu)化,并考察了方法的穩(wěn)定性、靈敏度、檢測(cè)限等。結(jié)果顯示:衍生化方法反應(yīng)條件溫和(7
3、0℃反應(yīng)60 min),衍生物不用脫鹽處理即可直接進(jìn)行質(zhì)譜分析,檢測(cè)靈敏度高,避免了微量樣品的損失。 2.對(duì)色譜條件進(jìn)行優(yōu)化,建立了理想的單糖分析模式,并將此方法成功應(yīng)用于三種螺旋藻多糖的單糖組成分析。 3.對(duì)色譜分離條件進(jìn)行優(yōu)化,建立了寡糖鏈分析的HPIC分離和MALDI-TOF-MS分析方法。將該方法應(yīng)用于殼寡糖生物樣品的分析,首次實(shí)現(xiàn)了殼寡糖混合物的柱前衍生HPLC和MALDI-TOF-MS分析,較好的分析了殼寡糖
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