A亞型和類孟買型的臨床和基因分析.pdf

1、ABO血型系統(tǒng)是最早被人類發(fā)現(xiàn)的血型系統(tǒng)，在醫(yī)學輸血和器官移植等方面都具有重要意義。經(jīng)典的血型血清學方法可分為A、B、O、AB四種表型，但這以外存在其他ABO表型，表現(xiàn)為血型正定型和反定型不一致或抗原減弱，導致血型鑒定錯誤并引起輸血困難，造成這種表型的原因有常見新生兒抗原減弱、老年人抗體減弱，也有較少見基因突變造成血型變異，例如A亞型、B亞型、類孟買型、嵌合體等。本文主要探討血型變異造成的變異ABO表型，分析變異體的分子機制并制定合適的

2、輸血策略。
　　目的:
　　1、對臨床上28例正反定型不一致和抗原減弱標本進行基因測序分析，尋找突變位點，分析突變規(guī)律，并對其分子機制進行初步探討。
　　2、通過血清學和基因型鑒定確定正確血型，并探討輸血策略。
　　方法:
　　1、血清學方法測定
　　使用單克隆抗-A、抗-B對先證者進行正定型，A、B、O反定型細胞進行反定型，再通過抗-A1、抗-H、吸收放散等試驗進行分類。
　　2、PCR-SS

3、P
　　使用ABO基因分型試劑盒，PCR—SSP方法初步鑒定ABO基因分型。
　　3、基因測序
　　設計引物和探針，PCR技術擴增ABO基因第6號外顯子和第7號外顯子，F(xiàn)UT1基因第4號外顯子并測序，測序結果與美國NCBI基因庫所公布的標準序列進行對比分析。
　　4、制定輸血策略
　　采用儲存式自體輸血方法對符合條件的患者術前儲存自體血，術中給予回輸，并觀察輸血效果。
　　結果:
　　1、血清學

4、結果
　　28例正反定型不一致標本通過單克隆抗-A、抗-B、抗-A1、抗-H、吸收放散等試驗，結果1例A3亞型，1例Ael亞型，23例A2亞型，3例為類孟買型。
　　2、基因分析
　　1)25例A亞型檢測得1例A201，1例A208，1例A209，6例A205，1例A307，15例A1型?；蛲蛔冾愋统鼳201、A209存在1061堿基缺失，導致終止密碼子失效，酶蛋白C端多出21個氨基酸，其余均為堿基替換，且錯義突變居

5、多。A307等位基因第7號外顯子467C＞T和745C＞T雜合堿基改變，導致多肽鏈P156L和R249W，該位點突變在國內(nèi)未見報道。
　　2)3例類孟買型FUT1基因第4號外顯子547-552 delAG，堿基缺失引起的移碼突變提前形成終止密碼子，多肽鏈在268位提前終止，編碼產(chǎn)物為野生型多肽鏈鏈長的73.12％，其中1例FUT1基因第4號外顯子不僅存在547-552 delAG同時存在814A＞G雜合堿基改變突變，該復合突變在國

6、際上未見報道，814A＞G突變對α-1，2-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶活性是否有影響，有待進一步探討。
　　3、臨床輸血情況
　　采用儲存式白體輸血方式對3名患者術前備白體血液400-700ml，術中回輸，回輸過程順利，無輸血不良反應，比較采血前后及輸血前后血常規(guī)各項指標，顯示自體血液回輸效果良好。
　　結論:
　　1、本文發(fā)現(xiàn)突變類型除A201、A209和類孟買型hl存在堿基缺失，其余均為堿基替換，表明堿基替換是造成ABO

7、表型改變的主要原因，其中以錯義突變居多。
　　2、本文25例標本通過基因檢測得9個A2等位基因其中A205為6例(66.7％)，A201、A208、A209各為1例(11.1％)，研究結果與歐洲人群報道以A201為主不同，與喻瓊報道相似，從而表明A2等位基因在中國漢族人群存在多樣性，與歐美人群的基因構成存在明顯的差異，A205可能為中國漢族人群主要的A2等位基因。
　　3、在中國人群中首次發(fā)現(xiàn)A307等位基因，在第7號外顯子