A亞型和類(lèi)孟買(mǎi)型的臨床和基因分析.pdf

1、ABO血型系統(tǒng)是最早被人類(lèi)發(fā)現(xiàn)的血型系統(tǒng)，在醫(yī)學(xué)輸血和器官移植等方面都具有重要意義。經(jīng)典的血型血清學(xué)方法可分為A、B、O、AB四種表型，但這以外存在其他ABO表型，表現(xiàn)為血型正定型和反定型不一致或抗原減弱，導(dǎo)致血型鑒定錯(cuò)誤并引起輸血困難，造成這種表型的原因有常見(jiàn)新生兒抗原減弱、老年人抗體減弱，也有較少見(jiàn)基因突變?cè)斐裳妥儺?，例如A亞型、B亞型、類(lèi)孟買(mǎi)型、嵌合體等。本文主要探討血型變異造成的變異ABO表型，分析變異體的分子機(jī)制并制定合適的

2、輸血策略。
　　目的:
　　1、對(duì)臨床上28例正反定型不一致和抗原減弱標(biāo)本進(jìn)行基因測(cè)序分析，尋找突變位點(diǎn)，分析突變規(guī)律，并對(duì)其分子機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　2、通過(guò)血清學(xué)和基因型鑒定確定正確血型，并探討輸血策略。
　　方法:
　　1、血清學(xué)方法測(cè)定
　　使用單克隆抗-A、抗-B對(duì)先證者進(jìn)行正定型，A、B、O反定型細(xì)胞進(jìn)行反定型，再通過(guò)抗-A1、抗-H、吸收放散等試驗(yàn)進(jìn)行分類(lèi)。
　　2、PCR-SS

3、P
　　使用ABO基因分型試劑盒，PCR—SSP方法初步鑒定ABO基因分型。
　　3、基因測(cè)序
　　設(shè)計(jì)引物和探針，PCR技術(shù)擴(kuò)增ABO基因第6號(hào)外顯子和第7號(hào)外顯子，F(xiàn)UT1基因第4號(hào)外顯子并測(cè)序，測(cè)序結(jié)果與美國(guó)NCBI基因庫(kù)所公布的標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行對(duì)比分析。
　　4、制定輸血策略
　　采用儲(chǔ)存式自體輸血方法對(duì)符合條件的患者術(shù)前儲(chǔ)存自體血，術(shù)中給予回輸，并觀察輸血效果。
　　結(jié)果:
　　1、血清學(xué)

4、結(jié)果
　　28例正反定型不一致標(biāo)本通過(guò)單克隆抗-A、抗-B、抗-A1、抗-H、吸收放散等試驗(yàn)，結(jié)果1例A3亞型，1例Ael亞型，23例A2亞型，3例為類(lèi)孟買(mǎi)型。
　　2、基因分析
　　1)25例A亞型檢測(cè)得1例A201，1例A208，1例A209，6例A205，1例A307，15例A1型。基因突變類(lèi)型除A201、A209存在1061堿基缺失，導(dǎo)致終止密碼子失效，酶蛋白C端多出21個(gè)氨基酸，其余均為堿基替換，且錯(cuò)義突變居

5、多。A307等位基因第7號(hào)外顯子467C＞T和745C＞T雜合堿基改變，導(dǎo)致多肽鏈P156L和R249W，該位點(diǎn)突變?cè)趪?guó)內(nèi)未見(jiàn)報(bào)道。
　　2)3例類(lèi)孟買(mǎi)型FUT1基因第4號(hào)外顯子547-552 delAG，堿基缺失引起的移碼突變提前形成終止密碼子，多肽鏈在268位提前終止，編碼產(chǎn)物為野生型多肽鏈鏈長(zhǎng)的73.12％，其中1例FUT1基因第4號(hào)外顯子不僅存在547-552 delAG同時(shí)存在814A＞G雜合堿基改變突變，該復(fù)合突變?cè)趪?guó)

6、際上未見(jiàn)報(bào)道，814A＞G突變對(duì)α-1，2-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶活性是否有影響，有待進(jìn)一步探討。
　　3、臨床輸血情況
　　采用儲(chǔ)存式白體輸血方式對(duì)3名患者術(shù)前備白體血液400-700ml，術(shù)中回輸，回輸過(guò)程順利，無(wú)輸血不良反應(yīng)，比較采血前后及輸血前后血常規(guī)各項(xiàng)指標(biāo)，顯示自體血液回輸效果良好。
　　結(jié)論:
　　1、本文發(fā)現(xiàn)突變類(lèi)型除A201、A209和類(lèi)孟買(mǎi)型hl存在堿基缺失，其余均為堿基替換，表明堿基替換是造成ABO

7、表型改變的主要原因，其中以錯(cuò)義突變居多。
　　2、本文25例標(biāo)本通過(guò)基因檢測(cè)得9個(gè)A2等位基因其中A205為6例(66.7％)，A201、A208、A209各為1例(11.1％)，研究結(jié)果與歐洲人群報(bào)道以A201為主不同，與喻瓊報(bào)道相似，從而表明A2等位基因在中國(guó)漢族人群存在多樣性，與歐美人群的基因構(gòu)成存在明顯的差異，A205可能為中國(guó)漢族人群主要的A2等位基因。
　　3、在中國(guó)人群中首次發(fā)現(xiàn)A307等位基因，在第7號(hào)外顯子