創(chuàng)傷性休克大鼠模型的制作及羥乙基淀粉對其淋巴細胞功能影響的研究.pdf

1、研究背景及目的: 嚴重創(chuàng)傷性休克為青壯年患者的最大死亡原因之一,創(chuàng)傷性休克復蘇后常出現(xiàn)各種并發(fā)癥,導致住院時間延長,醫(yī)療費用增加.許多學者在損傷控制、液體復蘇方法以及復蘇后機體免疫紊亂等方面大量的研究表明,在損傷已控制的基礎上有效的容量復蘇不僅能增加早期復蘇的成功率,并且能減輕全身的炎癥反應,改善機體免疫功能紊亂,降低全身嚴重感染及多臟器功能衰竭的發(fā)生以提高嚴重創(chuàng)傷性休克的治愈率.然而在選擇早期復蘇液體的種類上,一直存在著晶體/

2、膠體、自然膠體/人工膠體孰優(yōu)孰劣的爭論,同時臨床上也缺乏一些評價機體免疫功能紊亂的可靠指標. 機體在嚴重創(chuàng)傷休克時會出現(xiàn)毛細血管內(nèi)皮損傷及滲漏導致白蛋白及約75﹪輸入的晶體滲至間質(zhì),引起組織水腫并進一步加重毛細血管對液體的扣押和組織的缺氧,同時機體細胞免疫功能特別是T細胞功能明顯受抑,表現(xiàn)為T細胞IL-2mRNA表達及產(chǎn)生和分泌減少,IL-2受體表達降低以及T細胞亞群及其細胞因子表達降低.羥乙基淀粉(HES)具有"堵塞"毛細血管

3、滲漏的作用,能有效改善微循環(huán)的血液流變學異常,增加組織氧供.HES可明顯減輕創(chuàng)傷休克后全身炎癥反應及血管內(nèi)皮的損傷,同時可能通過破壞以血清IL-2,IL-4,IL-10,γ-IFN等水平為標志的促炎反應及抗炎反應的平衡而誘導淋巴細胞的增殖與分化的改變. HES(130/0.4)作為第三代中分子量(130kd)低取代級(C2/C6:0.4)羥乙基淀粉產(chǎn)品更具有擴容效果佳,體內(nèi)蓄積少,微循環(huán)及組織氧張力改善佳,凝血功能及腎功能障礙等

4、并發(fā)癥少的優(yōu)點.本研究的目的為在建立一個穩(wěn)定可靠的創(chuàng)傷性休克模型的基礎上探討HES(130/0.4)是否能改善創(chuàng)傷性休克大鼠淋巴細胞的增殖與分化功能紊亂. 對象與方法: 1.采用"斷股骨+動脈放血+液體復蘇"大鼠創(chuàng)傷性休克的模型.鈍性離斷右股骨作為主要創(chuàng)傷因素.動脈快速放血,以平均動脈壓降至30mmHg為目標. 2.分別以不同的復蘇液體(林格氏液,6﹪HES(130/0.4),5﹪白蛋白)及不同的取材時間(復蘇后

5、24,48小時)多組進行對照研究.復蘇液體量按照大鼠體重計量. 3.監(jiān)測創(chuàng)傷后0,1,3,24小時血清乳酸,pH值,動脈血氧分壓,堿剩余,血清鉀及肌酐濃度等生化指標以及腎肺臟器病理改變評價模型的穩(wěn)定性. 4.分別用AnnexinV/PI染色法(流式細胞儀)及末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導的原位末端標記法檢測骨髓單個核細胞凋亡比例. 5.用流式細胞儀法檢測創(chuàng)傷前后外周血淋巴細胞CD4+、CD8+T細胞數(shù)量及CD4+/CD

6、8+比值. 6.用細胞內(nèi)因子檢測法(流式細胞儀)檢測創(chuàng)傷前后外周血CD4+細胞向、TH1/TH2的分化能力. 7.用CD4+/Annexin V法(流式細胞儀)檢測脾臟CD4+細胞凋亡. 8.統(tǒng)計學方法數(shù)據(jù)用spss12.0統(tǒng)計軟件分析.組間采用t檢驗. 結果: 1.大鼠創(chuàng)傷性休克模型建立成功,模型鼠能達到平均動脈壓30mmHg的休克要求,具有一定的復蘇成功率.同時創(chuàng)傷休克后大鼠血氧合能力,乳酸水

7、平,腎臟功能,電解質(zhì)改變明顯并且穩(wěn)定.肺腎等臟器的病理學改變亦較為顯著,模型建立成功. 2.創(chuàng)傷休克后CD4+細胞數(shù)量明顯下降,而HES復蘇后第48小時,CD4+細胞數(shù)量即能恢復到正常水平.CD8+細胞數(shù)量未發(fā)現(xiàn)明顯改變. 3.創(chuàng)傷性休克后外周血CD4+淋巴細胞分化出現(xiàn)"TH1向TH2漂移"的改變,且HES能改變此趨勢. 4.與對照組比較,HES組復蘇后CD4+T細胞凋亡比例未呈現(xiàn)先升后降的改變. 5.與

8、對照組比較,流式細胞儀法和TUNNEL法均發(fā)現(xiàn)HES組復蘇后骨髓單個核細胞凋亡比例未見明顯升高. 結論: 1.該創(chuàng)傷性休克動物模型可造成機體明顯的病生理損傷,且操作簡便,易控制. 2.創(chuàng)傷性休克后大鼠外周血CD4+T淋巴細胞數(shù)量明顯減少,CD4+T細胞的進一步分化能力表現(xiàn)為"TH1向TH2漂移",脾CD4+T細胞及骨髓單個核細胞凋亡明顯增加等.機體細胞免疫功能受到明顯抑制. 3.羥乙基淀粉(130/0.4