骨髓干細胞外基質(zhì)對脂肪干細胞影響實驗研究.pdf

1、背景：
　　如何修復大面積骨缺損是整形外科工作的重點和難點之一。骨再生醫(yī)學的興起為骨缺損修復手術中的骨來源提供了一種有效解決方法。骨髓干細胞由于其良好成骨能力而成為傳統(tǒng)的骨再生醫(yī)學種子細胞。但取材難產(chǎn)量少等限制了其廣泛應用。脂肪干細胞的發(fā)現(xiàn)為骨再生醫(yī)學提供了另外一種良好的種子細胞。
　　骨再生醫(yī)學中傳統(tǒng)的種子細胞擴增方法在增加細胞數(shù)量的同時也會導致細胞分化能力的逐步喪失。由此，尋找一種新的，能夠用來擴增細胞，又能維持其分化能

2、力的培養(yǎng)材料是相關研究人員的研究方向之一。
　　文獻證實細胞外基質(zhì)有可能是一種理想的種子細胞擴增材料。
　　由此我們設計并進行了如下實驗驗證人骨髓干細胞來源細胞外基質(zhì)對脂肪干細胞擴增能力及對其成骨分化能力的影響。
　　目的：
　　本實驗應用人骨髓細胞來源細胞外基質(zhì)做為脂肪干細胞的擴增培養(yǎng)材料，以常規(guī)細胞培養(yǎng)皿（傳統(tǒng)細胞擴增方法）作為對照，對擴增過程中脂肪干細胞的增殖及擴增后細胞的增殖分化能力（特別是成骨方面的分化

3、）進行相關研究，從而對人細胞外基質(zhì)對脂肪干細胞的影響做出一些初步探索。
　　方法：
　　本實驗通過對比兩種不同細胞培養(yǎng)材料（常規(guī)培養(yǎng)皿和細胞外基質(zhì)）中的擴增的脂肪干細胞在細胞增殖和成脂成骨分化方面的變化來探討細胞外基質(zhì)對脂肪干細胞的影響。
　　原代脂肪干細胞分別以相同濃度接種于常規(guī)培養(yǎng)皿和細胞外基質(zhì)上，連續(xù)培養(yǎng)擴增2代，其間記錄每代細胞增殖數(shù)量。擴增后的細胞分別使用MTT法測定細胞的增殖速度，單細胞克隆實驗測定細胞的自

4、我復制能力，單細胞克隆成脂或成骨誘導實驗測定細胞的體外分化能力，實時定量PCR測定細胞相關基因的表達情況，動物體內(nèi)實驗檢測細胞在體內(nèi)的擴增成骨情況。
　　結果：
　　原代脂肪干細胞經(jīng)人骨髓來源的細胞外基質(zhì)連續(xù)兩代擴增后，其數(shù)量為常規(guī)培養(yǎng)皿所得細胞數(shù)量的3.27倍。當細胞脫離細胞外基質(zhì)環(huán)境后重新進行增殖能力和自我復制能力測定，結果顯示與對照組相比無明顯區(qū)別。
　　在人骨髓干細胞來源細胞外基質(zhì)上連續(xù)兩代的擴增后的脂肪干細胞

5、具備成脂能力的克隆數(shù)量減少，而成骨克隆數(shù)量增加；Real time PCR顯示經(jīng)細胞外基質(zhì)擴增后的脂肪干細胞成骨相關基因表達增高；體內(nèi)成骨實驗結果顯示經(jīng)細胞外基質(zhì)擴增后的脂肪干細胞，形成的骨質(zhì)膠原的量明顯多于常規(guī)擴增細胞所形成的膠原量。
　　結論：
　　與傳統(tǒng)的細胞培養(yǎng)擴增方法相比，人骨髓來源細胞外基質(zhì)能夠迅速擴增脂肪組織干細胞并且在擴增過程中對脂肪干細胞分化產(chǎn)生影響：抑制成脂促進成骨。
　　人骨髓干細胞來源的細胞外基