脊髓TNF-α和磷酸化p38MAPK在大鼠切口痛中的作用.pdf

1、本研究分為四部分： 第一部分、切口痛大鼠脊髓TNF-α的變化 目的:觀察切口疼痛模型中，大鼠疼痛行為學(xué)、痛閾和脊髓TNF-α的變化。 方法:健康成年雄性SD 大鼠60 只隨機(jī)分為對(duì)照組（C組）和依那西普（E組），每組30 只。戊巴比妥鈉麻醉大鼠后，對(duì)大鼠左后爪足底實(shí)施手術(shù)刺激；然后對(duì)C組大鼠鞘內(nèi)注射生理鹽水10μl，對(duì)E組大鼠鞘內(nèi)注射TNF-α 拮抗劑依那西普100μg（10μl）。按照手術(shù)切割刺激后-1（術(shù)前1

2、h）、4、8、16和24h 隨機(jī)分配大鼠，每組每一時(shí)間點(diǎn)6 只。用Dynamic Plantar Aesthesiometer和Plantar test 7375 分別測(cè)定大鼠機(jī)械性痛閾和熱痛閾；用RT-PCR 方法測(cè)定腰段脊髓TNF-α mRNA 表達(dá)和用Western Blot 方法測(cè)定脊髓TNF-α蛋白的表達(dá)。 結(jié)論:在大鼠切口疼痛模型中，手術(shù)刺激后，大鼠活動(dòng)頻繁，出現(xiàn)術(shù)側(cè)足翹起、跛行、舔咬傷口等異常行為，CPS升高，機(jī)械

3、性痛閾和熱痛閾下降，這些異常表現(xiàn)在術(shù)后4～16h 表現(xiàn)明顯，與臨床上手術(shù)后患者疼痛狀態(tài)接近；手術(shù)后大鼠脊髓TNF-α mRNA和蛋白表達(dá)升高，在術(shù)后4～16h 維持在較高水平，大鼠脊髓TNF-α 參與了手術(shù)后疼痛的產(chǎn)生和維持。 第二部分、鞘內(nèi)注射TNF-α 對(duì)大鼠痛閾的影響 目的:觀察鞘內(nèi)注射不同劑量的TNF-α蛋白對(duì)大鼠機(jī)械痛閾和熱痛閾的影響。 方法:健康成年雄性SD 大鼠24 只，隨機(jī)分為4組，每組6 只。對(duì)

4、照組（C組）：鞘內(nèi)注射生理鹽水10μl；TNF-α1組（T1組）：鞘內(nèi)注射TNF-α1ng（10μl）；TNF-α5組（T5組）：鞘內(nèi)注射TNF-α5ng（10μl）；TNF-α10組（T10組）：鞘內(nèi)注射TNF-α10ng（10μl）。腹腔注射1％戊巴比妥鈉40mg/㎏麻醉大鼠后，大鼠取俯臥位，墊高下腹部以充分顯露大鼠腰椎間隙，用微量注射器（25μl）于L5～L6 間隙直接穿刺注射給藥（生理鹽水和不同劑量的重組大鼠TNF-蛋白），鞘內(nèi)

5、注射后-1（鞘內(nèi)注射前1h）、4、8、16和24h 用Dynamic Plantar Aesthesiometer和Plantar test 7375 分別測(cè)定大鼠機(jī)械性痛閾和熱痛閾。 結(jié)論:鞘內(nèi)注射TNF-α 可導(dǎo)致中樞痛覺過敏，使大鼠機(jī)械性痛閾和熱痛閾降低，隨著注射劑量增加，機(jī)械痛閾和熱痛閾下降幅度增加并且維持時(shí)間延長(zhǎng)。 第三部分、切口痛大鼠脊髓磷酸化p38MAPK的變化 目的:觀察切口疼痛模型中，大鼠疼痛行

6、為學(xué)、痛閾和脊髓p38MAPK的變化。 方法:健康成年雄性SD 大鼠90 只，隨機(jī)分為三組：對(duì)照組（C組）、二甲基亞砜組（D組）和SB203580組（S組），每組30 只。戊巴比妥鈉麻醉大鼠后，在大鼠左后爪足底實(shí)施手術(shù)刺激；然后對(duì)C組大鼠鞘內(nèi)注射生理鹽水10μl，對(duì)D組大鼠鞘內(nèi)注射2％二甲基亞砜10μl，對(duì)S組大鼠鞘內(nèi)注射p38MAPK 特異性抑制劑SB203580（溶于2％二甲基亞砜）10μg（10μl）。按照手術(shù)切割刺激后-

7、1、4、8、16和24h時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)分配大鼠，每組每一時(shí)間點(diǎn)6 只。手術(shù)切割刺激后-1（術(shù)前1h）、4、8、16和24h觀察大鼠行為學(xué)變化；用Dynamic Plantar Aesthesiometer和Plantar test 7375 分別測(cè)定大鼠機(jī)械性痛閾和熱痛閾；用Western Blot 方法測(cè)定脊髓p38MAPK和磷酸化p38MAPK的表達(dá)。 結(jié)論:在大鼠切口疼痛模型中，手術(shù)刺激后，大鼠活動(dòng)頻繁，出現(xiàn)術(shù)側(cè)足翹起、跛行、

8、舔咬傷口等異常行為，累積疼痛評(píng)分升高，機(jī)械性痛閾和熱痛閾下降，這些異常表現(xiàn)在術(shù)后4～16h 表現(xiàn)明顯，與臨床上手術(shù)后患者疼痛狀態(tài)接近；手術(shù)后大鼠脊髓p38MAPK 磷酸化水平升高，在術(shù)后8h 達(dá)最高水平，大鼠脊髓p38MAPK 信號(hào)傳遞途徑參與了手術(shù)后疼痛的產(chǎn)生和維持。 第四部分、鞘內(nèi)注射沙利度胺和SB203580 對(duì)切口痛大鼠的影響 目的:觀察鞘內(nèi)注射沙利度胺和SB203580 后，切口痛大鼠行為學(xué)、疼痛閾值和脊髓TN

9、F-α、p38MAPK 及磷酸化p38MAPK的變化。 方法:90 只健康成年雄性SD 大鼠，隨機(jī)分為三組：對(duì)照組（C組）、沙利度胺組（T組）和SB203580組（S組），每組30 只。戊巴比妥鈉麻醉大鼠后，對(duì)大鼠左后爪足底實(shí)施手術(shù)刺激。術(shù)后C組大鼠鞘內(nèi)注射生理鹽水10μl，T組鞘內(nèi)注射沙利度胺100μg（10μl），S組鞘內(nèi)注射SB203580（溶于2％二甲基亞砜）10μg（10μl）。按照術(shù)后-1（術(shù)前1h）4、8、16和2

10、4h隨機(jī)分配大鼠，每組每一時(shí)間點(diǎn)6只。在上述時(shí)間點(diǎn)觀察每組大鼠行為學(xué)變化；用Dynamic Plantar Aesthesiometer和Plantar test 7375 分別測(cè)定大鼠機(jī)械性痛閾和熱痛閾；用RT-PCR 方法測(cè)定腰段脊髓TNF-αmRNA 表達(dá)和用Western Blot 方法測(cè)定脊髓TNF-α蛋白、p38MAPK 及P-p38MAPK的表達(dá)。 結(jié)論:大鼠脊髓TNF-α和P-p38MAPK 表達(dá)上調(diào)，兩者相互促