AngⅡ-P38MAPK信號通路在大鼠非甾體類抗炎藥相關小腸損傷中的作用.pdf

1、目的：本研究用雙氯芬酸短期灌胃建立大鼠非甾體類抗炎藥（NSAIDs）相關小腸損傷模型，通過檢測大鼠小腸組織中腎素血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）、磷酸化p38絲裂原活化蛋白激酶（p-P38MAPK）及細胞間黏附分子-1（ICAM-1）的表達，探討AngⅡ-P38MAPK信號通路在大鼠NSAIDs相關小腸損傷中的作用及其對ICAM-1表達的調控，進一步明確NSAIDs相關小腸損傷的機制。同時實驗中給予吉法酯進行干預，觀察其對小腸損傷是否具有防治作

2、用，以期為臨床防治NSAIDs相關小腸損傷提供新的思路和實驗依據(jù)。
　　方法：24只健康、雄性SD大鼠按隨機數(shù)字表法分為實驗對照組，雙氯芬酸模型組和吉法酯干預組，每組8只。實驗對照組予生理鹽水灌胃（1mL/100g，1次/d），雙氯芬酸模型組參照雙氯芬酸人類常規(guī)口服治療劑量（75mg/d）折算成大鼠灌胃所需劑量7.8mg-1kg-1d給大鼠灌胃（1mL/100g，1次/d）。吉法酯干預組在造模前1d，先給予吉法酯31.25 mg-

3、1kg-1d（1mL/100g，1次/d）灌胃，造模當日起，每天先予吉法酯31.25 mg-1kg-1d灌胃（1mL/100g，1次/d），1h后，再予雙氯芬酸7.8mg-1kg-1d灌胃。連續(xù)造模5d后麻醉處死所有大鼠，觀察小腸損傷情況，并進行大體及病理組織學評分；免疫組化及免疫印跡法（Western Blot）法檢測小腸組織中p-P38MAPK蛋白的表達；免疫組化法檢測小腸黏膜中AngⅡ和ICAM-1的表達，并進行相關性分析。

4、>　　結果：應用7.8mg-1kg-1d雙氯芬酸灌胃5d后，雙氯芬酸模型組大鼠小腸損傷明顯，小腸黏膜出現(xiàn)不同程度的充血水腫、糜爛及潰瘍形成，大體評分為（3.13±1.25分），較實驗對照組（0.00±0.00分）顯著升高（P＜0.01），吉法酯干預組病變程度較模型組有所減輕，大體評分結果（1.13±1.36分）與模型組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。鏡下可見雙氯芬酸模型組小腸組織出現(xiàn)不同程度的上皮結構消失，小腸絨毛壞死脫落，黏膜

5、變薄，固有層充血水腫，伴大量炎癥細胞浸潤，并可見毛細血管充血及淋巴管明顯擴張。小腸病理組織學Chiu氏評分結果，雙氯芬酸模型組（3.00±0.76分）顯著高于實驗對照組（0.00±0.00分）（P＜0.01）。而經(jīng)吉法酯干預后，小腸黏膜損傷（1.75±0.71分）較模型組明顯減輕（P＜0.05）。
　　AngⅡ主要表達于小腸黏膜上皮細胞及血管內(nèi)皮細胞胞漿中，以上皮細胞的表達更為明顯。在雙氯芬酸模型組小腸黏膜中，AngⅡ的表達顯著強

6、于實驗對照組（P＜0.01），而在吉法酯干預組的表達較模型組有所減弱（P＜0.05）；p-P38MAPK主要表達于小腸黏膜上皮細胞和黏膜固有層的炎癥細胞，細胞核與細胞漿均有表達，且在模型組中的表達最強，在實驗對照組和吉法酯干預組表達很弱或基本不表達，差異均有統(tǒng)計學意義（P均＜0.01），進一步用Western Blot法檢測p-P38MAPK蛋白表達水平，實驗對照組小腸組織僅檢測到微弱的p-P38MAPK蛋白表達，其相對表達量為0.34

7、±0.14，模型組小腸組織p-P38MAPK蛋白的相對表達量為1.73±0.35，顯著高于實驗對照組（P＜0.01），吉法酯干預組小腸組織p-P38MAPK蛋白的相對表達量為0.87±0.10，較模型組顯著降低（P＜0.01）。ICAM-1主要表達于小腸黏膜的上皮細胞，黏膜固有層的炎癥細胞和腸組織的血管內(nèi)皮細胞胞漿內(nèi)，其中以在炎癥細胞的表達更為明顯，ICAM-1在實驗對照組和吉法酯干預組中的表達很弱或基本不表達，在模型組顯著增強，差異有

8、統(tǒng)計學意義（P＜0.01，P＜0.05）。
　　相關分析顯示，AngⅡ、p-P38MAPK及ICAM-1的表達均與小腸黏膜組織學損傷呈正相關（r值分別為0.719，0.746，0.790，P均＜0.01），AngⅡ與p-P38MAPK的表達，p-P38MAPK與ICAM-1的表達均呈正相關（r值分別為0.679，0.836，P均＜0.01）。
　　結論：7.8mg-1kg-1d雙氯芬酸短期內(nèi)給大鼠灌胃即可致大鼠小腸損傷。實驗

9、發(fā)現(xiàn)，AngⅡ、p-P38MAPK和 ICAM-1在損傷的小腸黏膜中均有較高表達，且與腸黏膜損傷嚴重程度呈正相關，表明其參與了NSAIDs相關小腸損傷的發(fā)病過程。AngⅡ可能通過激活P38MAPK信號通路，上調ICAM-1的表達，介導了腸道炎癥反應。這一結果提示AngⅡ-P38MAPK信號通路的激活可能是NSAIDs小腸損傷的發(fā)病機制之一。吉法酯對于NSAIDs相關小腸黏膜損傷具有一定的保護作用，可有效減輕腸黏膜損傷，其機制可能與抑制A