P38MAPK在缺血后處理減輕大鼠肺再灌注損傷中的作用及其機(jī)制.pdf

1、目的:
　　探討P38MAPK在缺血后處理(IPO)減輕大鼠LIRI中的作用及其機(jī)制。
　　方法:
　　1.雄性SD大鼠40只（體重200～250g），根據(jù)不同處理方法，用隨機(jī)數(shù)表法分成5組(n=8)，即對(duì)照組（C組）、肺缺血/再灌注組（I/R組）、肺缺血/再灌注+缺血后處理組(IPO組)、缺血后處理+溶劑對(duì)照組（0.4％DMSO的PBS溶液）（D組）、缺血后處理+SB203580組（SB組）。全身麻醉，行氣管插管，呼

2、吸機(jī)機(jī)械通氣，切開左側(cè)胸部，游離左肺門，動(dòng)脈夾夾閉，復(fù)制在體原位左肺缺血/再灌注模型。C組游離左肺門后不夾閉肺門，觀察2.5 h;I/R組游離并夾閉左肺門造成缺血0.5 h，松開動(dòng)脈夾再灌注2h; IPO組在再灌注前連續(xù)給予3次的再灌注30sec/缺血30sec后處理，余同I瓜組;D組缺血前給予7.5 ml/kg體重的0.4％DMSO的PBS溶液，余同IPO組;SB組缺血前尾靜脈注射1 mg/kg SB203580（1 mg SB203

3、580溶于7.5 ml0.4％DMSO的PBS溶液），余同IPO組。
　　2.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，取頸動(dòng)脈血檢測(cè)血清超氧化物歧化酶(SOD)和髓過氧化物酶(MPO)的活性及丙二醛(MDA)含量;取肺組織稱量其濕/干重比(W/D)并計(jì)算總肺水含量(TLW);光鏡、電鏡觀測(cè)肺組織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)改變，并行肺組織損傷定量評(píng)估(IQA);選用原位缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)肺細(xì)胞凋亡情況并算出凋亡指數(shù)（AI);分別用RT-PCR法、免疫組織化學(xué)法測(cè)

4、定肺組織Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.I/R組血清SOD活性較C組顯著降低;MDA含量、MPO活力亦明顯升高(P均＜0.05)， IPO組、D組、SB組與I/R組相比，MDA含量、MPO活力顯著降低，SOD活性與二者相反(P＜0.05)，D組與IPO組比較三者均無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均＞0.05），SB組與IPO組相比，SOD活性升高，MDA含量、MPO活力與之相反(P＜0.05)。
　

5、　2.肺組織W/D、TLW、IQA這三個(gè)指標(biāo)中，I/R組較C組均顯著升高(P均＜0.05）;IPO組、D組、SB組與I/R組相比，肺組織W/D、TLW、IQA值顯著降低(P均＜0.05);D組與IPO組相比，三者均無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均＞0.05）; SB組與IPO組相比，SB組肺組織W/D、TLW、IQA值顯著降低（P均＜0.05）。
　　3.光鏡檢查:C組肺泡結(jié)構(gòu)完整，未見肺間質(zhì)增寬水腫，無炎性細(xì)胞滲出、浸潤(rùn);
　　I/

6、R組肺泡結(jié)構(gòu)紊亂，內(nèi)可見較多炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、紅細(xì)胞滲出，偶可見局部實(shí)變;D組、IPO組與I/R組比較，可見肺泡內(nèi)紅細(xì)胞滲出及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)不同程度減輕，肺泡結(jié)構(gòu)較完整;
　　SB組肺泡結(jié)構(gòu)完整度接近C組，肺間質(zhì)水腫基本無水腫，可見少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，未見紅細(xì)胞滲出。
　　4.透射電鏡檢查:
　　C組毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡Ⅰ型、Ⅱ型上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，胞內(nèi)細(xì)胞器無異常，無核固縮、碎裂，核內(nèi)染色質(zhì)無聚集;
　　I/R組肺內(nèi)肺

7、泡Ⅰ型上皮細(xì)胞胞內(nèi)吞飲小泡減少，核固縮，核內(nèi)染色質(zhì)邊集;肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞微絨毛脫落，胞膜腫脹，核膜擴(kuò)張，細(xì)胞核固縮，板層小體減少、空泡化并大量脫落到肺泡腔內(nèi)，線粒體水腫并脊消失，;
　　D組、IPO組肺內(nèi)細(xì)胞損傷明顯減輕，毛細(xì)血管腔光滑，未見塌陷，肺泡Ⅰ型上皮細(xì)胞水腫減輕，吞飲小泡增加;肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞板層小體增加，絨毛脫落減少，胞內(nèi)線粒體水腫減輕，脊可見;
　　SB組組各型細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，和染色質(zhì)分布均勻，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞微

8、絨毛基本無脫落，胞內(nèi)板層小體數(shù)量接近C組，無空泡化，線粒體未見明顯水腫、脊清晰可見。
　　5.肺組織TUNEL法示與C組相比，I/R組AI值顯著升高;D組、SB組、U組、IPO組AI值較I/R組顯著降低（P均＜0.05），D組與IPO組相比無明顯差異(P＞0.05)，SB組顯著低于IPO組。肺泡上皮細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞是凋亡細(xì)胞的主要類型。
　　6.RT-PCR檢測(cè)mRNA結(jié)果顯示:在C組Bcl-2呈高水平表達(dá)、Bax表達(dá)不明

9、顯，I/R組較C組Bcl-2表達(dá)明顯下降、Bax明顯上調(diào)，同時(shí)Bcl-2/Bax的比值降低(P均＜0.05);與I/R組比較，D組、SB組、IPO組Bcl-2 mRNA及Bcl-2/Bax顯著升高，Bax mRNA表達(dá)減弱（P均＜0.05）;D組與IPO組相比無顯著差異(P＞0.05）;SB組與IPO組比較，Bcl-2及二者比值升高、Bax表達(dá)下降。
　　7.免疫組化檢測(cè)各組肺組織Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)，在C組Bcl-2呈高水

10、平表達(dá)、Bax表達(dá)不明顯，I/R組表達(dá)較C組Bcl-2及Bcl-2/Bax明顯下降、Bax明顯上調(diào)（P均＜0.05）;與I/R組比較，D組、SB組、IPO組Bcl-2蛋白及二者比之表達(dá)增高，Bax表達(dá)減弱(P＜0.05)，D組與IPO組相比無明顯差異(P＞0.05)，SB組Bcl-2表達(dá)及二者比值較IPO組明顯增高、Bax表達(dá)明顯降低。Bcl-2與Bax陽性細(xì)胞主要分布于血管內(nèi)皮細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞及肺泡上皮細(xì)胞。
　　結(jié)論: