納米銀離子對銅綠假單胞菌生物被膜的細菌死亡率及其結(jié)構(gòu)的影響.pdf

1、第一部分： [目的]模擬體內(nèi)環(huán)境，體外建立細菌生物被膜模型，為進一步深入研究細菌生物被膜生物學特點提供基礎(chǔ)。 [方法]將粘附載體置于氣溶膠法和搖床法模擬體內(nèi)細菌生物被膜形成的微環(huán)境中，將銅綠假單胞菌株培養(yǎng)3天后，取出標本分別進行通過FITC-ConA染色及SYTO9/PI染色，然后分別進行熒光顯微鏡檢測及激光共聚焦檢測，觀察細菌生物被膜的形成情況；進行電子顯微鏡掃描觀察形成的細菌生物被膜的形態(tài)特點。 [結(jié)果]在氣

2、溶膠的微環(huán)境下，F(xiàn)ITC-ConA染色后在熒光顯微鏡觀察到明亮成片狀的細菌生物被膜；SYTO9/PI染色后在激光共聚焦檢測，觀察到片狀，層疊如積云狀，棉絮樣的細菌生物被膜；在電子顯微鏡掃描觀察到大量細菌成團聚集，團狀叢生突出表面，具有立體結(jié)構(gòu)的細菌生物被膜。在搖床法的微環(huán)境下，用三種檢測方法都觀察到成流線狀的細菌生物被膜。 [結(jié)論]運用氣溶膠法、搖床法可成功建立分別模擬體內(nèi)呼吸系統(tǒng)及循環(huán)、泌尿系統(tǒng)的微環(huán)境下生物被膜形成模型。

3、 第二部分： [目的]探討納米銀離子對細菌生物被膜（Biofilm，BF）的細菌死亡率和其空間結(jié)構(gòu)的影響。 [方法]采用搖床法，以納米銀離子含量不同的乙烯-醋酸乙烯酯（Ethylene-Vinyl acetate，EVA）塑料為細菌粘附載體，模擬體內(nèi)銅綠假單胞菌（P.aeruginosa，PA）BF形成的微環(huán)境，建立體外BF模型；將培養(yǎng)3d的空白標本分別在掃描電子顯微鏡（scanning electron micro

4、scopy，SEM）下及用FITC-ConA染色后熒光顯微鏡下觀察不含納米銀EVA中BF的形成情況；將生長0.5、1、2、3、5d的BF模型行SYTO9/PI染色，激光共聚焦掃描電鏡（confocal laser scanning microscopy，CLSM）下攝取不同層面的圖像，然后應用Image Pro Plus6.0分析軟件分析不同干預條件下PAO1菌株BF的細菌的死亡率和應用ISA分析軟件獲得PAO1菌株BF的相關(guān)空間結(jié)構(gòu)參

5、數(shù)定量化數(shù)據(jù)。 [結(jié)果]①運用SEM及熒光顯微鏡的方法，在以不含納米銀EVA塑料為細菌粘附載體上培養(yǎng)3d的標本中均觀察到流線狀的BF形成。②Image Pro Plus6.0分析軟件定量化分析顯示，納米銀離子含量、作用時間對PAO1菌株BF的細菌死亡率均有明顯影響（F=84.62，85.67，p<0.0001）；不同時間組含有納米銀離子材料的PAO1菌株BF的細菌死亡率均顯著高于空白對照組（P<0.05）；納米銀離子含量不同的2

6、種材料上PAO1菌株BF的細菌死亡率無明顯影響（P>0.05）；納米銀離子含量不同的（0、0.05％、0.1％）材料上PAO1菌株的BF，其第1、2、3天細菌死亡率均分別顯著高于第0.5、5d的細菌死亡率（P<0.05）；含納米銀離子0.1％的材料上BF在作用的第2天其細菌死亡率最高（88.53±1.88）％。③ISA軟件定量化分析顯示，銀離子含量、作用時間對BF空間結(jié)構(gòu)均有明顯影響，不同時間組含有納米銀離子材料上BF的區(qū)域孔率（Are

7、al Porosity，AP）、平均擴散距離（Average Diffusion Distance，ADD）及結(jié)構(gòu)熵（Textural Entropy，TE）影響的均顯著高于空白對照組（P<0.05），但2種納米銀離子材料上BF的AP、ADD及TE的影響無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。隨著培養(yǎng)時間的延長，各含納米銀離子材料組PAO1菌株BF的AP值、ADD值無明顯的變化趨勢，同一時間組的含有納米銀離子材料組PAO1菌株BF的AP值都高于空

8、白對照組的AP值；同一時間組的含有納米銀離子材料組PAO1菌株BF的ADD值都低于空白對照組的ADD值。各含納米銀離子材料組PAO1菌株BF的TE值隨著時間的延長，都呈先升高后降低的趨勢，2d組都為最高值；同一時間組的TE值隨著含納米銀離子的增加都呈降低趨勢。④隨著時間的延長，各含納米銀離子材料組PAO1菌株BF的平均厚度都呈先升高后降低的趨勢，3d組都達最高值；納米銀離子的含量對BF厚度的影響無統(tǒng)計學差異（F值=2.11，p>0.1）