2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus,PCV)屬于圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬,是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最小動物病毒之一,分為兩型:PCV1和PCV2。PCV1無致病性,PCV2被認為是豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的病原,并且與其它多種豬病相關,而PMWS給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失,因此PCV2成為研究的熱點。近年來隨著PCV2的ORF3蛋白

2、具有細胞凋亡作用,與病毒致病性有關這一理論的提出與證實,關于ORF3蛋白功能的研究逐漸引起人們的重視。在已有理論基礎之上,本研究擬構(gòu)建PCV2感染性克隆,通過點突變造病毒ORF3蛋白,通過試驗研究ORF3蛋白對病毒增殖的影響以及對細胞凋亡作用的影響,在病毒整體水平上研究ORF3蛋白功能,并確定主要作用區(qū)段。研究主要包括以下內(nèi)容:
   1、PCV2-SD株全基因組克隆測序與序列分析本研究從疑似感染PMWS的病豬體內(nèi)分離到一株PC

3、V2(命名為PCV2-SD),通過PCR得到病毒全基因組進行序列分析表明,PCV2-SD的核苷酸序列與GeneBank登錄的一些具有代表性的PCV2參考序列同源性高達96%~98.9%,ORF3推導氨基酸同源性92%-99%。
   2、PCV2-SD株感染性克隆的構(gòu)建及改造將兩個病毒全基因組同向串聯(lián)入pUC19載體,構(gòu)建雙拷貝感染性克隆。在不影響ORF1正常氨基酸序列前提下,利用PCR定點誘變技術(shù)對ORF3進行改造,分別在OR

4、F3氨基酸的第1、27、51、79位終止表達,構(gòu)建四個ORF3缺失的感染性克隆。將這5個感染性克隆分別轉(zhuǎn)染PK-15細胞,IFA鑒定,結(jié)果表明這五個克隆均能拯救出具有感染性的病毒粒子。
   3、ORF3蛋白對PCV2-SD株生物學性能的影響研究將轉(zhuǎn)染質(zhì)粒拯救出的五株病毒等量接種于PK-15細胞,分別在1h、12h、24h、36h、48h提取病毒DNA,定量PCR進行核酸定量,結(jié)果說明ORF3的完全或部分缺失對PCV2感染PK-

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