過氯酸銨對甲狀腺細胞毒作用機制的研究.pdf

1、目的:過氯酸銨(Ammonium Perchlorate,AP)被廣泛用于軍事工業(yè)及民用化工行業(yè),易于通過呼吸道進入作業(yè)人員體內,影響作業(yè)人員健康。研究表明AP可抑制甲狀腺細胞攝取合成其激素的原料碘,從而抑制甲狀腺正常功能,造成對人體健康的危害。本研究旨在通過對體外培養(yǎng)的人正常甲狀腺細胞Nthy-ori 3-1進行染毒,探討AP對甲狀腺細胞的毒作用機制,為預防和控制AP對作業(yè)人員的職業(yè)危害提供理論依據。
　　方法:培養(yǎng)人正常甲狀腺

2、細胞Nthy-ori 3-1于5％CO2,37℃二氧化碳培養(yǎng)箱,待細胞生長至對數生長期,接種細胞至培養(yǎng)板繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)板內細胞進入對數期后,分別給予AP劑量為0、5、10、20、40、60mmol/L的培養(yǎng)液進行染毒,并于一定時間后,觀察細胞形態(tài)學變化,收集培養(yǎng)的細胞和培養(yǎng)上清液做以下指標測定:用噻唑藍比色法(MTT法)測定細胞存活率,用比色法測定乳酸脫氫酶(LDH)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)水平,用流式細胞技術檢測法

3、測定細胞凋亡率,用酶聯免疫吸附試驗測定甲狀腺球蛋白(Tg)濃度。
　　結果:隨著AP染毒劑量的增加,各AP染毒劑量組細胞較對照組細胞貼壁能力減弱,脫落并懸浮于培養(yǎng)液中的懸浮細胞增多,細胞密度降低,體積縮小,形狀由長梭形漸變?yōu)閳A形或不規(guī)則形;而對照組細胞未見以上異常變化。AP60mmol/L劑量作用于細胞12h、24h、48h、72h時,細胞存活率分別為74.93%、42.26%、2.66%、0.99%,AP40mmol/L劑量作用

4、于細胞24h、48h、72h時,細胞存活率分別為73.15%、30.91%、3.03%,各劑量組均較對照組(100%)顯著降低(P<0.05或P<0.01)。細胞培養(yǎng)液中LDH活力隨AP染毒劑量的增加而增大,40mmol/L劑量組細胞培養(yǎng)液中LDH活力為0.70U/mL,較對照組(0.55U/mL)顯著升高(P<0.01)。細胞凋亡率隨AP染毒劑量的增加而增大,10、20、40、60mmol/L劑量組細胞總凋亡率分別為23.04%、24

5、.27%、24.40%、33.50%,較對照組(15.66%)顯著增加(P<0.01);20、40、60mmol/L劑量組細胞早期凋亡率分別為15.70%、15.84%、16.96%,較對照組(9.54%)顯著增加(P<0.05或P<0.01);60mmol/L劑量組細胞晚期凋亡率為16.54%,較對照組(6.11%)顯著增加(P<0.01)。隨著AP染毒劑量的增加,各劑量組細胞培養(yǎng)液中MDA含量有降低的趨勢,與對照組(2.36nmol

6、/mL)相比,僅5mmol/L劑量組(1.08nmol/mL)差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);各劑量組細胞培養(yǎng)液中SOD活力與對照組相比無明顯變化(P>0.05);各劑量組細胞培養(yǎng)液中Tg濃度有降低的趨勢,但與對照組相比,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　結論:本研究通過人正常甲狀腺細胞Nthy-ori 3-1體外培養(yǎng),顯示AP可造成人甲狀腺細胞形態(tài)變化、細胞存活率下降及細胞培養(yǎng)液中LDH活力升高,并可誘導人甲狀腺細胞發(fā)生