HCV核心區(qū)多肽對(duì)細(xì)胞毒T細(xì)胞抑制作用的研究.pdf

1、近年來(lái),國(guó)內(nèi)外有許多關(guān)于HCV轉(zhuǎn)梁、感染細(xì)胞模型的報(bào)道,但所建立的細(xì)胞模型與自然感染狀態(tài)的人肝細(xì)胞存在較大差別.我們用丙型肝炎病人血清中存在的HCV體外感染正常成人肝細(xì)胞,以期建立與自然感染狀態(tài)最為接近、更適宜于進(jìn)行免疫發(fā)病機(jī)制和防治等研究的細(xì)胞模型.此外,CTL是執(zhí)行細(xì)胞免疫反應(yīng)的主要效應(yīng)細(xì)胞,在清除病毒感染和阻止感染慢性化中起關(guān)鍵作用,但在漫性HCV感染中CTL常常不能發(fā)揮其功效,影響因素可能是多方面的,核心區(qū)多肽對(duì)CTL有抑制作用

2、,可能是其功能缺陷的重要原因之一,我們篩選合成了部分HCV核心區(qū)多肽,免疫BALA/c小鼠,觀察這些多肽對(duì)小鼠CTL的影響.以下為主要研究結(jié)果和結(jié)論.1.用HCV核心區(qū)多肽皮下注射免疫BALB/c小鼠后,大多數(shù)小鼠健康反應(yīng)良好,取出小鼠脾臟后,注射CPA<,10>、CPB<,1>、CPB<,2>、CPB<,6>組脾臟肉眼觀察較正常陰性組增大,余脾臟與正常陰牲組大小相似.2.除CPA<,1>組因部分結(jié)果效靶比過(guò)高超出檢測(cè)范圍,余CTL檢測(cè)

3、計(jì)算結(jié)果經(jīng)方差分析,同次實(shí)驗(yàn)陰性及正常對(duì)照組CTL活性無(wú)顯著性差異,HCV核心區(qū)多肽CPA<,9>(39~74位氨基酸)、CPB<,7>(67~76位氨基酸)、CPB<,8>(71-80位氨基酸)對(duì)BALB/c小鼠CTL有抑制作用,CPA<,10>(5~23位氨基酸)、CPB<,6>(63~72位氨基酸)、CPB<,2>(131~140位氨基酸)對(duì)小鼠CTL有增強(qiáng)作用.3.用HCV核心區(qū)抑制性多肽CPB<,7>、CPB<,8>和增強(qiáng)性多

4、肽CPB<,2>、CPB<,6>交叉組合后共同免疫BALB/c小鼠,其CTL活性經(jīng)單因素方差分析,正常和空白對(duì)照無(wú)顯著性差異,CPB<,2>+CPB<,7>、CPB<,6>+CPB<,7>組與正常、空白對(duì)照組無(wú)明顯差異,CPB<,2>+CPB<,8>組、CPB<,6>+CPB<,8>組中效靶細(xì)胞比為10:1,20:1的CTL活性顯著高于對(duì)照組,雙因素方差分析顯示HCV核心區(qū)抑制性多肽和增強(qiáng)性多肽有交互作用,抑制性多肽中CPB<,7>對(duì)增

5、強(qiáng)性多肽的影響更為明顯.4.用體外二步灌流法分離正常成人肝細(xì)胞,分離后細(xì)胞用臺(tái)盼藍(lán)染色,肝細(xì)胞存活率約90﹪,24h后約70~80﹪細(xì)胞貼壁,分離肝細(xì)胞在體外可存活一月余.5.用免疫組化法檢測(cè)加入HCV感染血清后的正常成人肝細(xì)胞內(nèi)HCVNS3、NS5抗原表達(dá),可見自感染血清加入4日起,有呈棕色的陽(yáng)性細(xì)胞出現(xiàn),主要抗原表達(dá)在胞漿,陽(yáng)性細(xì)胞無(wú)明顯形態(tài)改變.陰性對(duì)照及空白對(duì)照無(wú)表達(dá)HCV NS3、NS5抗原的陽(yáng)性細(xì)胞.6.用RT-PCR法檢測(cè)