糖毒性對大鼠甲狀腺細(xì)胞TG、TPO表達(dá)的影響.pdf

1、目的：本實驗以Fischer大鼠甲狀腺細(xì)胞系（FRTL）為研究對象，在體外從細(xì)胞和分子水平研究高糖毒性及AGEs對甲狀腺細(xì)胞甲狀腺球蛋白（TG）、甲狀腺過氧化物酶（TPO）mRNA表達(dá)的影響，初步探索除免疫機(jī)制外，糖毒性致甲狀腺組織損傷的機(jī)制。 方法：在體外用D-glucose與BSA共同孵育AGEs-BSA。將體外培養(yǎng)成功的FRTL細(xì)胞分為+TSH組（完全培養(yǎng)基中加TSH）和-TSH組（完全培養(yǎng)基中未加TSH），每組分別給予不

2、同濃度的D-glucose、AGEs及AGEs抗體刺激，在糖刺激組設(shè)置滲透組以排除滲透壓因素對細(xì)胞的影響，于24h、48h、72h分別收集細(xì)胞，使用實時熒光定量PCR測定TG、TPO mRNA的表達(dá)情況。 結(jié)果： ①12周后得到棕褐色產(chǎn)物AGEs-BSA。AGEs-BSA熒光光譜掃描：其激發(fā)波長為360nm，發(fā)射波長為450nm，AGEs-BSA的熒光值高于BSA，其濃度為52.446g/ml。 ②實驗中FRTL

3、細(xì)胞無污染，圓形較亮，成堆生長，密度適中，貼壁良好。 ③實時熒光定量PCR檢測TG、TPOmRNA的表達(dá)水平：在+TSH組與-TSH組：D-glucose刺激組及AGEs刺激組中，每個刺激時間中組間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）；且在D-glucose刺激組，對照組與滲透組比較差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；+TSH組不同濃度D-glucose刺激24h、48h、72h后；15mmol/L組低于對照組、滲透組（TG、TP

4、O：24h：P>0.05；48h：P<0.001；72h：P<0.001）；20mmol/L組低于15mmol/L組、對照組、滲透組（TG、TPO：24h：P>0.05、P<0.001；48h：P<0.001、P=0.908，0.000，0.000；72h：P=0.910，0.000，0.000、P=0.513，0.000，0.000）；30mmol/L組明顯低于15mmol/L組、20mmol/L組、對照組、滲透組（TG、TPO：24

5、h：P<0.001；48h：P=0.289，0.314，0.000，0.000、P<0.001；72h：P=0.723，0.818，0.000，0.000、P=0.000，0.000，0.484，0.962）；-TSH組不同濃度D-glucose刺激細(xì)胞24h、48h、72h后：15mmol/L組低于TSH刺激組、對照組、滲透組（TG，TPO：24h、48h、72h：P<0.001）：20mmol/L組低于15mmol/L組、TSH刺激

6、組、對照組、滲透組（TG、TPO：24h：P=0.022，0.000，0.000，0.000、P=0.871，0.000，0000，0000；48h：P=0.855，0.000，0.000，0.000、P=0.383，0.000，0.000，0.000；72h：P=0.657，0.000，0.000，0.000、P=0.878，0.000，0.000，0.000）；30mmol/L組明顯低于15mmol/L組、20mmol/L組、TSH

7、刺激組、對照組、滲透組（TG、TPO：24h：P=0.001，0.100，0.000，0.000，0.000、P<0.05；48h：P=0.859，0.996，0.000，0.000，0.000、P=0.131，0.027，0.000，0.000，0.000：72h：P=0.002，0.005，0.000，0.000，0.000、P=0.059，0.045，0.000，0.000，0.000）；+TSH組不同濃度AGEs分別刺激細(xì)胞24

8、h、48h、72h后：0.25mg/dl組低于AGEs抗體組、對照組（TG、TPO：24h：P<0.001、P<0.001；48h：P<0.001、P<0.001；72h：P=0.685，0.000、P<0.001）；0.5mg/dl組低于0.25mg/dl組、對照組（TG、TPO：24h：P=0.254，0.000、P<0.001；48h：P=0.669，0.000、P=0.229，0.000；72h：P=0.658，0.000、P=

9、0.539，0.000）；1.0mg/dl組低于0.25mg/dl組、0.5mg/dl組、對照組（TG、TPO：24h：P=0.435，0.700，0.000、P=0.000，0.993，0.000；48h：P=0.002，0.003，0.003、P<0.001；72h：P=0.364，0.631，0.000、P<0.001）；-TSH組不同濃度AGEs刺激細(xì)胞24h、48h、72h后：0.25mg/dl組低于AGEs抗體組、TSH刺激

10、組、對照組（TG、TPO：24h、48h、72h：P<0.001）；0.5mg/dl組低于0.25mg/dl組、TSH刺激組、對照組（TG、TPO：24h：P=0.945，0.000、0.000、P<0.001；48h：P<0.001、P=0.001，0.000，0.000；72h：P=0.973，0.000，0.000、P=0.970，0.000，0.000）；1.0mg/dl組低于0.25mg/dl組、0.5mg/dl組、TSH刺激

11、組、對照組（TG、TPO：24h：P=0.887，0.945，0.000，0.000、P=0.000，0.535，0.000，0.000：48h：P=0.887，0.594，0.000，0.000、P=0.001，0.893，0.000，0.000；72h：P<0.001、P<0.001）。 結(jié)論：不同濃度的D-glucose組及AGEs組的TG、TPOmRNA的表達(dá)較對照組有下降的趨勢，且隨著D-glucose、AGEs濃度的