訶子湯制草烏對(duì)心肌細(xì)胞毒性損傷及減毒機(jī)制研究.pdf

1、本課題以毛茛科植物北烏頭的干燥塊根（蒙藥“泵嘎”）為研究對(duì)象。用蒙醫(yī)傳統(tǒng)炮制方法訶子湯炮制草烏，乙醚分別提取生草烏和訶子湯制草烏中的總生物堿。以原代培養(yǎng)的乳大鼠心肌細(xì)胞為對(duì)象研究生草烏、訶子湯制草烏總生物堿對(duì)心肌細(xì)胞的毒性;以細(xì)胞存活率（MTT法）、細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)漏出率等指標(biāo)反映細(xì)胞毒性變化;采用Hoechst33528熒光染色法和AnnexinV/PI雙染色法研究心肌細(xì)胞凋亡;并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)心肌細(xì)胞[Ca2+]i變化，研

2、究訶子湯制草烏對(duì)心肌細(xì)胞毒性損傷及減毒機(jī)制研究。
　　 心肌細(xì)胞毒性機(jī)制的研究:制備乳大鼠原代心肌細(xì)胞，細(xì)胞平均存活率≥91％，經(jīng)免疫組織化學(xué)染色鑒定，小鼠抗大鼠α-橫紋肌肌動(dòng)蛋白為陽(yáng)性而兔抗大鼠纖連蛋白多克隆抗體為陰性。將訶子湯制草烏總生物堿和生草烏總生物堿給予心肌細(xì)胞，共同孵育30min、60min，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩者均能降低心肌細(xì)胞活力，細(xì)胞LDH漏出率增加，發(fā)生細(xì)胞凋亡，產(chǎn)生細(xì)胞毒性;生草烏總生物堿對(duì)心肌細(xì)胞存活抑制率和乳酸脫

3、氫酶(LDH)漏出率均強(qiáng)于訶子湯制草烏總生物堿(P＜0.01);且生草烏總生物堿致使心肌細(xì)胞的凋亡率高于訶子湯制草烏總生物堿(P＜0.05);給藥組的早期凋亡率小于晚期凋亡率;在給藥30min時(shí)，用熒光探針Fluo4-AM檢測(cè)心肌細(xì)胞[Ca2+]i變化，發(fā)現(xiàn)訶子湯制草烏和生草烏總生物堿均可提高心肌細(xì)胞[Ca2+]i，但訶子湯制草烏總生物堿提高細(xì)胞[Ca2+]i均低于生草烏總生物堿相同劑量組。認(rèn)為生草烏總生物堿改變心肌細(xì)胞[Ca2+]i是

4、導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡的最終可能機(jī)制。
　　 減毒機(jī)制通過(guò)研究:不同濃度的生草烏總生物堿和訶子湯制草烏總生物堿對(duì)心肌細(xì)胞的影響程度不同，通過(guò)細(xì)胞活力、細(xì)胞膜通透性變化、細(xì)胞凋亡程度和細(xì)胞[Ca2+]i的變化來(lái)評(píng)價(jià)兩者對(duì)心肌細(xì)胞的毒性;研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)訶子湯制草烏總生物堿通過(guò)減輕心肌細(xì)胞膜通透性及低細(xì)胞凋亡率，從而降低心肌細(xì)胞毒性。訶子湯炮制草烏對(duì)心肌細(xì)胞[Ca2+]i影響弱于生草烏，認(rèn)為這是訶子湯制草烏降低心肌毒性的可能機(jī)制。通過(guò)以上對(duì)生