蔥子的生物活性及生藥鑒定.pdf

1、隨著我國(guó)社會(huì)經(jīng)濟(jì)的迅速發(fā)展，心血管疾病的發(fā)病率也相應(yīng)增長(zhǎng)。從流行病學(xué)研究到臨床觀察均發(fā)現(xiàn)，以高血壓、腦卒中和冠心病為代表的心腦血管疾病有日益增多的趨勢(shì)，對(duì)中、老年人群構(gòu)成嚴(yán)重的威脅，影響著人類的期望壽命和生存質(zhì)量。根據(jù)我國(guó)流行病學(xué)調(diào)查，上世紀(jì)50-60年代我國(guó)人口死亡原因中，心腦血管病居第五位，1975年則上升至第二位，而90年代以后，心腦血管疾病死亡人數(shù)已占全部疾病死因之首。我國(guó)因心腦血管疾病死亡者占總死亡人口的百分比，己由1957年

2、的12.07％上升到2003年的50.2％，每年死于心腦血管疾病的患者達(dá)300萬(wàn)。 心肌缺血(myocardialischemiaMI)是發(fā)病率較高的一類心血管疾病。它是冠脈循環(huán)改變引起冠脈血流量和心肌需求量之間不平衡的病理狀態(tài)。發(fā)作時(shí)，患者感覺(jué)心前區(qū)劇烈陣發(fā)性悶痛或絞痛；當(dāng)反復(fù)發(fā)作及再灌注發(fā)生時(shí)還會(huì)引起心肌細(xì)胞的損傷和心臟功能的紊亂，主要表現(xiàn)為：心律失常、血管損傷甚至血液滯留、心肌功能喪失、加速缺血致?lián)p傷心肌細(xì)胞的壞死、心肌細(xì)

3、胞水腫等。因此，心肌缺血的預(yù)防、治療和預(yù)后的藥物研究和開(kāi)發(fā)已成為各國(guó)極其重視的研究課題。百合科蔥屬植物約有500余種，廣泛分布于北半球，我國(guó)境內(nèi)約有110種(包括變種和引進(jìn)的外來(lái)種)，主要分布于東北、華北、西北及西南地區(qū)，用做蔬菜及調(diào)味品。其中作藥用的約20種，如小根蒜、蒜、韭、蔥、洋蔥等。蔥子SemenAlliiFistulosi是百合科蔥屬植物蔥AlliumfistulosumL.的干燥成熟種子，生于田野，在全國(guó)各地廣泛栽培，資源豐

4、富，以山東產(chǎn)量最大。國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究表明，蔥屬植物中含有黃酮，甾體皂苷，硫化物，生物堿，脂肪酸等成分，主要用于抗菌及抗真菌，抗腫瘤，抗血小板聚集，抗氧化等，近幾年尤其關(guān)注的是其心血管活性，據(jù)報(bào)道，蔥屬植物有降低膽固醇及甘油三脂，降血壓，減慢心律，抗動(dòng)脈粥樣硬化等作用。但關(guān)于蔥子的化學(xué)成分及藥理活性還未見(jiàn)報(bào)道。 在藥理篩選過(guò)程中我們發(fā)現(xiàn)，蔥子提取物具有較好抗心肌缺血的作用，為進(jìn)一步確證其防治心肌缺血活性，我們采用多種動(dòng)物模型進(jìn)行了藥

5、效學(xué)驗(yàn)證：對(duì)犬急性心肌缺血的作用；對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用；對(duì)麻醉犬血流動(dòng)力學(xué)的影響；對(duì)麻醉犬心肌耗氧量的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蔥子提取物能顯著減輕犬心肌梗塞時(shí)的心肌缺血程度，減小梗死范圍，減輕缺血心肌細(xì)胞的損傷；對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷有保護(hù)作用，可明顯抑制缺血再灌注所致大鼠心肌損傷時(shí)LDH、CK溢出，降低血清LDH、CK活性，可明顯縮小心肌梗塞范圍；對(duì)各劑量組麻醉犬心率、血壓、收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓、左心室收縮壓、左心室

6、平均壓、左心室舒張壓、左心室收縮壓最大變化速率、左心室舒張末期壓等血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)均顯示有波動(dòng)，但與給藥前比較差異均不顯著；可明顯增加麻醉犬冠脈流量，明顯降低心肌氧攝取率，顯著降低心肌耗氧量；對(duì)心輸出量、總外周阻力均無(wú)明顯影響。從而明確證實(shí)了蔥子提取物具有防治心肌缺血的活性。 在研究過(guò)程中我們發(fā)現(xiàn)，蔥子存在嚴(yán)重品種混亂現(xiàn)象，其主要混淆品種為近緣植物韭AlliumtuberosumRottl.exSpreng的種子，兩者在外觀形態(tài)上

7、非常相似，很難分辨。我們從原植物形態(tài)，生藥性狀，理化性質(zhì)幾方面對(duì)蔥子和韭子進(jìn)行了研究，認(rèn)為其主要區(qū)別在于：原植物形態(tài)，蔥，鱗莖單生，鱗莖外皮多為白色，葉圓筒狀，中空，向頂端漸狹，約與花葶等長(zhǎng)，粗在0.5cm以上，傘形花序，小花梗纖細(xì)，與花被等長(zhǎng)，或?yàn)槠?～3倍長(zhǎng)，基部無(wú)小苞片，花絲為花被片長(zhǎng)度的1.5-2倍；而韭，鱗莖簇生，鱗莖外皮暗黃色至黃褐色，葉條形，扁平，實(shí)心，比花葶短，寬1.5～8mm，邊緣平滑，傘形花序，具多但較稀疏的花，小花

8、梗近等長(zhǎng)，比花被片長(zhǎng)2-4倍，基部具小苞片，花絲等長(zhǎng)，為花被片長(zhǎng)度的2/3-4/5。生藥性狀：蔥子呈三角形扁卵形，表面多光滑，偶有疏皺紋；韭子呈圓形或半卵圓形，表面粗糙，有細(xì)微的網(wǎng)狀皺紋。在理化性質(zhì)方面，薄層色譜顯示，蔥子和韭子提取液在相應(yīng)位置均顯相同顏色的斑點(diǎn)；紫外分光光度法測(cè)定亦表明二者主要化學(xué)成分相似，差別不顯著。 盡管蔥子與韭子的原植物形態(tài)鑒別能達(dá)到對(duì)兩者準(zhǔn)確鑒別的目的，但田間種植所需周期較長(zhǎng)，受環(huán)境影響較大，不能滿足市

9、場(chǎng)的需求。而蔥子、韭子的外觀性狀及化學(xué)成分，區(qū)別并不顯著，不能達(dá)到對(duì)兩者準(zhǔn)確、有針對(duì)性鑒別的目的。本研究采用分子標(biāo)記技術(shù)建立有效的鑒別兩種生藥的方法。利用AFLP(AmplifiedFragmentLengthPolymorphism)技術(shù)對(duì)采自全國(guó)不同產(chǎn)地的9份蔥子與13份韭子進(jìn)行了DNA多態(tài)性的分析。采用CTAB法直接以蔥子和韭子為材料提取總DNA，利用32對(duì)引物進(jìn)行初篩獲得了8對(duì)選擇性擴(kuò)增引物，根據(jù)電泳圖譜上擴(kuò)增條帶的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)構(gòu)建

10、了相似矩陣，利用非加權(quán)配對(duì)算數(shù)平均法(UPGMA，UnweighedPair-GroupMethodofwitharithmeticalAverages)聚類分析構(gòu)建了22個(gè)供試材料的系統(tǒng)樹(shù)狀圖。聚類分析顯示它們可以明確劃分為兩個(gè)主要類群，即蔥與韭兩個(gè)種。多態(tài)性分析表明兩者均存在豐富的種內(nèi)多態(tài)性(＞80％)。在8對(duì)選擇性引物擴(kuò)增獲得的AFLP指紋圖譜中，蔥與韭兩個(gè)種在相同的擴(kuò)增位點(diǎn)共同擁有17個(gè)特征性條帶，同時(shí)在蔥中具有15個(gè)獨(dú)有條帶而

11、在韭中具有6個(gè)獨(dú)有條帶。這些特征性條帶經(jīng)測(cè)序轉(zhuǎn)化為AFLPSCAR(SequenceCharacterizedAmplifiedRegion)后可作為分子標(biāo)記通過(guò)常規(guī)PCR技術(shù)用于兩個(gè)種的快速區(qū)分。上述結(jié)果表明AFLP技術(shù)為蔥子與韭子鑒定提供了一種更為有效的鑒定方法。 蔥子做為一種歷史悠久的生藥，其化學(xué)成分并沒(méi)有過(guò)系統(tǒng)闡明。我們合并利用硅膠、大孔樹(shù)脂、葡聚糖LH-20、反相硅膠柱層析、中壓柱等分離手段，對(duì)蔥子進(jìn)行系統(tǒng)分離，應(yīng)用理