鷹嘴豆皮多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定及生物活性研究.pdf

1、鷹嘴豆（Cicer arietinum）屬豆科野豌豆族鷹嘴豆屬，一年生或多年生草本植物，形似鷹嘴。鷹嘴豆的營養(yǎng)價值很高，含有多種蛋白質(zhì)，氨基酸，維生素，礦物質(zhì)，以及粗纖維等成分。具有平衡膳食、降血糖、降血壓、降血脂、提高兒童智力發(fā)育、增強(qiáng)骨骼生長以及延緩衰老等多種食用價值和保健功能。但是迄今為止，國內(nèi)外對鷹嘴豆皮中多糖的研究報道較少。本文研究了鷹嘴豆皮多糖的提取條件優(yōu)化、分離純化、抗氧化活性和免疫活性并初步鑒定了三種純化組分的結(jié)構(gòu)。

2、r>　　1、鷹嘴豆皮多糖的提取條件優(yōu)化
　　選取鷹嘴豆皮為原料，采用熱水浸提、減壓濃縮、乙醇沉淀、純水溶解和冷凍干燥的方法對鷹嘴豆皮中的粗多糖進(jìn)行了提取。
　　選擇了提取時間、提取溫度和液料比分別對鷹嘴豆皮粗多糖的得率做了單因素試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)鷹嘴豆皮粗多糖的得率從1.73％到5.60％不等。在單因素試驗的基礎(chǔ)上，采用Box-Behnken實驗(BBD)對以上三個因素的實驗組合進(jìn)行了優(yōu)化。采用Designexpert軟件對實驗

3、數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，得出最優(yōu)的提取條件為:提取時間2.8h、提取溫度99℃、提取液料比24 mL/g。在此條件下，鷹嘴豆皮粗多糖的最高得率為:5.37±0.15％。
　　2、鷹嘴豆皮多糖的分離純化及理化性質(zhì)
　　采用DEAE Fast Flow層析柱和SephadexG-100層析柱對鷹嘴豆粗多糖進(jìn)行純化，得到CHPS-1、CHPS-2和CHPS-3三個組分。CHPS-1、CHPS-2和CHPS-3的總糖含量分別為76.92％、8

4、7.99％和84.11％，蛋白質(zhì)含量分別為0.53％、1.02％和3.60％，糖醛酸含量分別為2.33％、3.16％和5.94％，硫酸基含量分別為1.76％、1.26％和1.26％，乙?；糠謩e為1.20％、1.38％和1.25％。
　　3、鷹嘴豆皮多糖的初步結(jié)構(gòu)鑒定
　　采用高效液相色譜法對CPHS-1、CHPS-2和CHPS-3進(jìn)行了純度和分子量的鑒定，結(jié)果顯示三個組分分別為均一的單峰，分子量分別為3097 KDa、1

5、504 KDa和782 KDa。
　　采用PMP柱前衍生化的方法對CHPS-1、CHPS-2和CHPS-3的單糖組成進(jìn)行了分析，結(jié)果表明:CHPS-1由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡糖糖、半乳糖和阿拉伯糖組成，摩爾比為0.03∶0.43∶0.06∶0.06∶0.43∶0.11。CHPS-2由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、半乳糖、木糖和阿拉伯糖組成，摩爾比為0.03∶0.22∶0.09∶0.43∶0.09∶0.14。CHPS-3由鼠李

6、糖、半乳糖醛酸和半乳糖組成，摩爾比為0.34∶0.08∶0.57。
　　紅外光譜掃描結(jié)果顯示，鷹嘴豆皮多糖（CHPS-1、CHPS-2和CHPS-3）都具有典型的多糖吸收峰。
　　4、鷹嘴豆皮多糖的抗氧化活性和免疫活性
　　采用化學(xué)方法，測定了粗CHPS、CHPS-1、CHPS-2和CHPS-3的體外抗氧化活性，結(jié)果表明粗CHPS、CHPS-1、CHPS-2和CHPS-3可以不同程度的清除DPPH自由基、ABTS自由基

7、、超氧陰離子自由基。并具有一定的還原能力。在細(xì)胞水平上粗CHPS、CHPS-1、CHPS-2和CHPS-3可以提高經(jīng)過氧化氫誘導(dǎo)氧化的PC12細(xì)胞的存活率。
　　采用RAW264.7細(xì)胞和環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)免疫缺陷小鼠的實驗動物模型分析了鷹嘴豆皮多糖的免疫活性。結(jié)果表明CHPS-1、CHPS-2和CHPS-3可以不同程度的提高RAW264.7細(xì)胞的增值率和中性紅的吞噬率。高劑量的CHPS-3可以顯著增加小鼠的胸腺脾臟指數(shù)，提高血清中溶菌