鷹嘴豆皮多糖的分離純化、結構鑒定及生物活性研究.pdf

1、鷹嘴豆（Cicer arietinum）屬豆科野豌豆族鷹嘴豆屬，一年生或多年生草本植物，形似鷹嘴。鷹嘴豆的營養(yǎng)價值很高，含有多種蛋白質，氨基酸，維生素，礦物質，以及粗纖維等成分。具有平衡膳食、降血糖、降血壓、降血脂、提高兒童智力發(fā)育、增強骨骼生長以及延緩衰老等多種食用價值和保健功能。但是迄今為止，國內外對鷹嘴豆皮中多糖的研究報道較少。本文研究了鷹嘴豆皮多糖的提取條件優(yōu)化、分離純化、抗氧化活性和免疫活性并初步鑒定了三種純化組分的結構。

2、r>　　1、鷹嘴豆皮多糖的提取條件優(yōu)化
　　選取鷹嘴豆皮為原料，采用熱水浸提、減壓濃縮、乙醇沉淀、純水溶解和冷凍干燥的方法對鷹嘴豆皮中的粗多糖進行了提取。
　　選擇了提取時間、提取溫度和液料比分別對鷹嘴豆皮粗多糖的得率做了單因素試驗，結果發(fā)現鷹嘴豆皮粗多糖的得率從1.73％到5.60％不等。在單因素試驗的基礎上，采用Box-Behnken實驗(BBD)對以上三個因素的實驗組合進行了優(yōu)化。采用Designexpert軟件對實驗

3、數據進行分析，得出最優(yōu)的提取條件為:提取時間2.8h、提取溫度99℃、提取液料比24 mL/g。在此條件下，鷹嘴豆皮粗多糖的最高得率為:5.37±0.15％。
　　2、鷹嘴豆皮多糖的分離純化及理化性質
　　采用DEAE Fast Flow層析柱和SephadexG-100層析柱對鷹嘴豆粗多糖進行純化，得到CHPS-1、CHPS-2和CHPS-3三個組分。CHPS-1、CHPS-2和CHPS-3的總糖含量分別為76.92％、8

4、7.99％和84.11％，蛋白質含量分別為0.53％、1.02％和3.60％，糖醛酸含量分別為2.33％、3.16％和5.94％，硫酸基含量分別為1.76％、1.26％和1.26％，乙酰基含量分別為1.20％、1.38％和1.25％。
　　3、鷹嘴豆皮多糖的初步結構鑒定
　　采用高效液相色譜法對CPHS-1、CHPS-2和CHPS-3進行了純度和分子量的鑒定，結果顯示三個組分分別為均一的單峰，分子量分別為3097 KDa、1

5、504 KDa和782 KDa。
　　采用PMP柱前衍生化的方法對CHPS-1、CHPS-2和CHPS-3的單糖組成進行了分析，結果表明:CHPS-1由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡糖糖、半乳糖和阿拉伯糖組成，摩爾比為0.03∶0.43∶0.06∶0.06∶0.43∶0.11。CHPS-2由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、半乳糖、木糖和阿拉伯糖組成，摩爾比為0.03∶0.22∶0.09∶0.43∶0.09∶0.14。CHPS-3由鼠李

6、糖、半乳糖醛酸和半乳糖組成，摩爾比為0.34∶0.08∶0.57。
　　紅外光譜掃描結果顯示，鷹嘴豆皮多糖（CHPS-1、CHPS-2和CHPS-3）都具有典型的多糖吸收峰。
　　4、鷹嘴豆皮多糖的抗氧化活性和免疫活性
　　采用化學方法，測定了粗CHPS、CHPS-1、CHPS-2和CHPS-3的體外抗氧化活性，結果表明粗CHPS、CHPS-1、CHPS-2和CHPS-3可以不同程度的清除DPPH自由基、ABTS自由基

7、、超氧陰離子自由基。并具有一定的還原能力。在細胞水平上粗CHPS、CHPS-1、CHPS-2和CHPS-3可以提高經過氧化氫誘導氧化的PC12細胞的存活率。
　　采用RAW264.7細胞和環(huán)磷酰胺誘導免疫缺陷小鼠的實驗動物模型分析了鷹嘴豆皮多糖的免疫活性。結果表明CHPS-1、CHPS-2和CHPS-3可以不同程度的提高RAW264.7細胞的增值率和中性紅的吞噬率。高劑量的CHPS-3可以顯著增加小鼠的胸腺脾臟指數，提高血清中溶菌