高效液相色譜與共振瑞利散射聯(lián)用技術(shù)在藥物分析中的研究與應(yīng)用.pdf

1、共振瑞利散射技術(shù)（Resonance Rayleigh scattering，RRS）因其靈敏度高、選擇性好、操作簡(jiǎn)便等顯著特點(diǎn)而廣泛應(yīng)用于核酸、蛋白質(zhì)等生物大分子及痕量元素的測(cè)定中。目前，RRS與流動(dòng)注射分析及毛細(xì)管電泳聯(lián)用方法的成功建立，充分發(fā)揮了RRS高靈敏度及高選擇性-的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)避免了其重現(xiàn)性及穩(wěn)定性較差的不足。
　　 高效液相色譜法（High performance liquid chromatography，HPL

2、C）是目前藥物分析中最常用的檢測(cè)方法，但HPLC與RRS聯(lián)用（HPLC-RRS）的方法鮮見(jiàn)報(bào)道。RRS技術(shù)作為一種新型的HPLC檢測(cè)方法，其突出優(yōu)點(diǎn)是色譜信號(hào)的產(chǎn)生不依賴(lài)于被測(cè)物本身的化學(xué)特性，尤其適用于無(wú)紫外特征吸收及非熒光物質(zhì)的檢測(cè)。本文建立了HPLC-RRS聯(lián)用的一般研究思路及實(shí)驗(yàn)方法，同時(shí)以氨基糖苷類(lèi)藥物及米托蒽醌的含量測(cè)定為例明確實(shí)驗(yàn)中各影響因素。此方法將HPLC自動(dòng)分離分析功能與RRS技術(shù)方法簡(jiǎn)便及靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)相結(jié)合，進(jìn)一

3、步拓寬了RRS技術(shù)的應(yīng)用范圍，并為HPLC提供了一種全新的檢測(cè)模式。本文的主要研究?jī)?nèi)容包括以下三個(gè)方面：
　　 1、高效液相色譜與共振瑞利散射聯(lián)用測(cè)定不同制劑中阿米卡星的含量。以滂胺天藍(lán)為探針，以共振瑞利散射法測(cè)定阿米卡星含量為基礎(chǔ)，建立聯(lián)用方法。采用Agilent Zorbox SB-C18 column（250mm×4.6mm i.d.，5μm）及保護(hù)柱（Security Guard C18，4×2mm，Pherlomene

4、x），流動(dòng)相為乙腈：水=7：93（v/v），流速0.50mL·min-1，λex=λem=362nm。探針為2.5×10-4mol·L-1的PSB溶液，pH為3.0，單泵的流速為0.05mL·min-1，反應(yīng)管長(zhǎng)150cm，內(nèi)徑0.5mm。阿米卡星的線性范圍均為1.0μg·mL-1～15.0μg·mL-1（R2=0.9993）；最低檢測(cè)限為0.5μg·mL-1；提取回收率為96.5％～101.0％；日內(nèi)精密度小于2.44％，日間精密度小

5、于4.58％。該方法簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高、選擇性好并成功用于不同制劑中AMK含量的測(cè)定中。
　　 2、高效液相色譜與共振瑞利散射聯(lián)用同時(shí)測(cè)定三種氨基糖苷類(lèi)抗生素的含量。以共振瑞利散射法測(cè)定妥布霉素、依替米星及奈替米星的含量為基礎(chǔ)，建立聯(lián)用方法。采用Agilent Zorbox SB-C18 column（250mm×4.6mm i.d.，5μm）及保護(hù)柱（Security Guard C18，4×2mm，Phenomenex），

6、流動(dòng)相為甲醇：水（含0.2％TFA）=5：95（v/v），流速0.50mL·min-1，λex=λem=362nm。探針為2.0×10-5mol·L-1的PSB溶液，pH為9.5，單泵的流速為0.2mL·min-1，反應(yīng)管長(zhǎng)250cm，內(nèi)徑0.5mm。三種氨基糖苷類(lèi)抗生素的線性范圍均為2.0μg·mL-1～20.0μg·mL-1，最低檢測(cè)限均為1.0μg·mL-1；提取回收率≥97.7％；日內(nèi)精密度在1.47％～2.68％之間；日間精密

7、度在3.45％～5.26％之間。上述HPLC-RRS方法己成功用于妥布霉素滴眼液、硫酸依替米星針劑及硫酸奈替米星針劑及混合樣品中氨基糖苷類(lèi)藥物的含量測(cè)定中。
　　 3、高效液相色譜與共振瑞利散射聯(lián)用測(cè)定健康人血漿及尿液中米托蒽醌的含量?；诿淄休祯c鉬酸銨的共振瑞利散反應(yīng)，建立高效液相色譜與共振瑞利散射聯(lián)用測(cè)定米托蒽醌的新方法。色譜柱為AgilentZorbox SB-C18 column（250mm×4.6mm i.d.，5μ

8、m）及保護(hù)柱（SecurityGuard C18.4×2mm，Phenomenex）。流動(dòng)相為乙腈：水=22：78（v/v），HPLC流速為0.50mL·min-1，λex=λem=365nm，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為242nm。以鉬酸銨溶液為探針，濃度為1.0×10-3mol·L-1，單泵的流速為0.2mL·min-1，反應(yīng)管長(zhǎng)150cm，內(nèi)徑0.5mm。該方法簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高、流動(dòng)相體系簡(jiǎn)單，采用等度洗脫，對(duì)儀器要求不高，已成功應(yīng)用于健康