高效液相色譜聯(lián)用技術(shù)的研究及其分析應(yīng)用.pdf

1、高效液相色譜(HPLC)是一種重要的分析和分離技術(shù)，在分析化學(xué)中發(fā)揮著極為重要的作用，除了研究固定相和流動(dòng)相之外，聯(lián)用技術(shù)也是發(fā)展HPLC技術(shù)的重要內(nèi)容。質(zhì)譜的通用性，高靈敏度，分子量和結(jié)構(gòu)信息的提供，以及通過柱后衍生儀將無(wú)生色團(tuán)的物質(zhì)接上紫外或熒光吸收基團(tuán)，使得HPLC的應(yīng)用范圍更廣，特別是無(wú)紫外光吸收和無(wú)熒光反應(yīng)體系的檢測(cè)更具重要意義。
　　 本文建立了LC-MS聯(lián)用技術(shù)測(cè)定嘉陵江水和蝦中的三類抗生素含量和正交優(yōu)化法合成兩個(gè)

2、脯氨酸有機(jī)催化劑并對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定的方法，并比較研究了鄰苯二甲醛(OPA)柱前和柱后衍生色譜法測(cè)定阿米卡星的優(yōu)缺點(diǎn)。論文由綜述和研究報(bào)告兩個(gè)部分組成。綜述部分簡(jiǎn)述了高效液相色譜的特點(diǎn)，聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展，在各領(lǐng)域的應(yīng)用現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢(shì)。研究報(bào)告部分建立了LC-MS聯(lián)用技術(shù)測(cè)定水環(huán)境和生物體內(nèi)抗生素的殘留以及對(duì)有機(jī)合成的產(chǎn)物檢測(cè)和機(jī)理解釋，并且建立了OPA柱前和柱后衍生色譜法測(cè)定氨基糖苷類藥物的比較研究。包括：LC-MS聯(lián)用技術(shù)同時(shí)測(cè)定嘉陵江水

3、和蝦中的三種抗生素的方法，高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜正交優(yōu)化法合成兩個(gè)脯氨酸有機(jī)催化劑并對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定，和OPA柱前和柱后衍生色譜法測(cè)定阿米卡星的比較研究。
　　 1.LC-MS聯(lián)用同時(shí)測(cè)定嘉陵江水和蝦中的三類抗生素
　　 應(yīng)用固相萃取和超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，建立了同時(shí)測(cè)定嘉陵江水和蝦中的三類抗生素。樣品經(jīng)固相萃取柱富集、凈化后進(jìn)入高效液相色譜-質(zhì)譜環(huán)境進(jìn)行分離和檢測(cè)。采用Gemini-C18色譜柱，流動(dòng)相為水和乙腈

4、以0.2 mL/min的流速，進(jìn)行梯度洗脫。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，克林霉素(CLD)在25～1250 pg·L-1，林可霉素(LIC)在10～625 pg·L-1，氧氟沙(OF)在10～625 pg·L-1，環(huán)丙沙星(CIP)在25～625 pg·L-1，土霉素(OTC)在25～2500 pg·L-1，四環(huán)素(TC)在pg·L-1和金霉素(CTC)在25～2500 pg·L-1都有良好的線性關(guān)系。線性回歸系數(shù)均大于0.999。樣品加標(biāo)回收率在94.

5、0％和108.0％之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(R.S.D.)均低于5.0％。方法簡(jiǎn)便，快速，靈敏，線性關(guān)系好，重復(fù)性高，可用于嘉陵江水環(huán)境的三種抗生素的測(cè)定。
　　 2.高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法優(yōu)化合成兩個(gè)脯氨酸有機(jī)催化劑并對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定
　　 一種簡(jiǎn)單、快速的正交反應(yīng)優(yōu)化手段以高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的形式建立。兩個(gè)脯氨酸有機(jī)催化劑即在優(yōu)化的條件下進(jìn)行了合成。該方法不僅找到了最佳的反應(yīng)條件，還能確定各因素之間對(duì)反應(yīng)作用的強(qiáng)弱，同

6、時(shí)還能在不中止反應(yīng)的情況下，依靠高效液相色譜的高效分離對(duì)原料和產(chǎn)物進(jìn)行分離；通過質(zhì)譜的強(qiáng)定性能力監(jiān)控反應(yīng)和對(duì)無(wú)生色基團(tuán)的產(chǎn)物進(jìn)行鑒定，從而對(duì)反應(yīng)機(jī)理進(jìn)行解釋。高效液相色譜不再因常用檢測(cè)器對(duì)檢測(cè)底物的結(jié)構(gòu)要求而受限，節(jié)約了時(shí)間，也拓展了HPLC-MS/MS的應(yīng)用。
　　 3.OPA柱前和柱后衍生色譜法測(cè)定阿米卡星的比較研究
　　 采用鄰苯二甲醛(OPA)和巰基醇建立的靈敏度高，選擇性好的柱前和柱后衍生測(cè)定在藥物制劑和人血清

7、的阿米卡星(AMI)，新霉素為內(nèi)標(biāo)物。熒光檢測(cè)，340 nm進(jìn)行激發(fā)，發(fā)射波長(zhǎng)為465 nm。測(cè)定比較發(fā)現(xiàn)柱前衍生有更寬的線性范圍0.1～50μg·mL-1(r≥0.999)，峰形也更好，但檢測(cè)限(LOD)為12.0 ng·mL-1，反應(yīng)的副作用多，實(shí)驗(yàn)更耗時(shí)；而柱后衍生測(cè)定的線性范圍的0.05～20μg·mL-1，檢測(cè)限為7.7 ng·mL-1，副反應(yīng)少，省時(shí)，但峰形更寬，衍生條件更為復(fù)雜。柱前和柱后回收率分別為91.7％和107.3