HMBA和桂皮酸對鼻咽癌細胞CNE2增殖抑制和凋亡的作用及其機制初探.pdf

1、目的:從細胞及分子水平初步探討誘導分化劑HMBA和桂皮酸對鼻咽癌細胞CNE2增殖抑制和凋亡的作用及其可能機制。
　　方法:應用誘導分化劑HMBA處理鼻咽癌細胞CNE2,倒置相差顯微鏡觀察處理前后鼻咽癌細胞的生長狀況和細胞形態(tài);MTT實驗及流式細胞術檢測細胞生長及細胞周期;Hoechst33258染色、吖啶橙染色觀察細胞凋亡;Annexin V-FITC/ PI法檢測 HMBA對 CNE2細胞早期凋亡的影響。RT-PCR檢測KLF6

2、基因mRNA的表達。免疫細胞化學方法檢測桂皮酸處理前后CNE2細胞中KLF6、p53、cyclin D1、c-Jun蛋白表達的變化。
　　結果:HMBA處理后貼壁細胞的數(shù)量隨藥物濃度增加明顯減少;MTT實驗證實HMBA對鼻咽癌細胞的生長抑制作用呈濃度-時間效應關系,隨著誘導劑濃度的增大、作用時間的延長,其抑制效應逐漸增加。處理后鼻咽癌細胞形狀由原來的橢圓形或多邊形變成不規(guī)則形狀或多角形;細胞質(zhì)減少,核漿比例變大。根據(jù)IC50,我們

3、選用5mmol/L作為最佳作用濃度進行后續(xù)實驗。流式細胞術檢測結果顯示,培養(yǎng)24h時對照組細胞Gl期細胞比例為59.5％,S期細胞比例27.5%,而G2期細胞比例為12.9%,HMBA處理24h后,Gl期細胞比例為64.9%;S期細胞為28.3%,G2期細胞為6.7%,細胞周期發(fā)生明顯變化(P<0.05);HMBA作用48h后 G1期細胞增加為67.5%,而S期細胞為28.5%,G2期細胞也減少為4.04%,細胞明顯被阻滯于G1期(P<

4、0.05);處理72h后,細胞亦顯著被阻滯于G1期(P<0.05),處理96h后,G1期細胞比例為60.2%,而S期細胞比例為32.2%,G2期細胞為7.63%,細胞周期 Gl期阻滯效應更明顯。我們采用三種方法觀察細胞凋亡,Hoechst33258染色后可見呈高亮藍色的凋亡細胞,在部分細胞內(nèi)可以看到核碎片;吖啶橙染色可以看到凋亡小體的出現(xiàn)。Annexin V-FITC/PI法檢測凋亡顯示,在HMBA處理12h后即出現(xiàn)凋亡細胞,與對照組相

5、比有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。RT-PCR結果顯示HMBA處理CNE2細胞后第3天, KLF6 mRNA表達水平顯著上調(diào)(p<0.05)。免疫細胞化學結果顯示桂皮酸處理CNE2細胞后KLF6和p53蛋白表達上調(diào)(p<0.05),而cyclin D1和c-Jun則表達下調(diào)(p<0.05)。
　　結論:誘導分化劑處理后,鼻咽癌細胞 CNE2生長明顯受到抑制,出現(xiàn)細胞分化形態(tài),細胞周期受阻,誘導細胞凋亡。其作用機理一方面可能是通過上調(diào)