敲低SAA基因表達對鼻咽癌CNE2細胞生長及凋亡的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：
　　利用shRNA技術(shù)沉默血清淀粉樣蛋白 A（SAA）表達，檢測該基因表達降低對人鼻咽癌CNE2細胞生長及凋亡的影響，為揭示SAA基因表達功能提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　采用shRNA技術(shù)，構(gòu)建3組針對SAA基因的shRNA真核表達干擾載體，并進行測序及blast對比鑒定；將shRNA真核表達干擾載體瞬時轉(zhuǎn)染人鼻咽癌CNE2細胞，通過PT-PCR及Western-blotting技術(shù)，篩選出有效的小干擾RN

2、A(siRNA)序列；利用shRNA技術(shù)和高表達載體分別沉默及過表達SAA基因，分別瞬時轉(zhuǎn)染CNE2細胞后，檢測及驗證該基因在 CNE2細胞中的表達水平；運用MTT及Hoechst33258熒光染色技術(shù)，觀察及分析SAA基因的表達對CNE2細胞的生長及凋亡的影響。
　　結(jié)果：
　　成功構(gòu)建針對SAA基因的shRNA真核表達干擾載體組，經(jīng)測序鑒定、blast對比、 PT-PCR及Western-blotting檢測，確定pGP

3、U6/GFP/Neo-SAA-homo-482為針對SAA基因設計的最有效的干擾RNA。將pGPU6/GFP/Neo-SAA-homo-482和pCD3.1（+）-SAA瞬時轉(zhuǎn)染人鼻咽癌CNE2細胞，PT-PCR及Western-blotting結(jié)果顯示：pGPU6/GFP/Neo-SAA-homo-482真核干擾載體可有效沉默CNE2細胞中的SAA蛋白,pCDNA3.1（+）-SAA真核過表達載體可有效地過表達SAA蛋白，且其結(jié)果具有

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