白樺脂酸對(duì)鼻咽癌細(xì)胞系CNE-1增殖，凋亡和Bcl-2表達(dá)的影響.pdf

1、目的： 惡性腫瘤的治療仍然是醫(yī)學(xué)的一大難題。目前，對(duì)腫瘤治療的方法有很多，主要有手術(shù)治療，化學(xué)治療和放療。對(duì)于有些不適合行手術(shù)治療的腫瘤，化療取得了不錯(cuò)的治療效果。白樺脂酸是一種新近發(fā)現(xiàn)的具有廣泛抑瘤作用小分子化療藥物。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究白樺脂酸對(duì)鼻咽癌細(xì)胞系CNE-1增殖和凋亡的影響。 方法： 體外培養(yǎng)鼻咽癌細(xì)胞系CNE-1,加入不同濃度的白樺脂酸（5-160ug/ml），作用不同時(shí)間（24h,48h,72h）后M

2、TT法計(jì)算抑制率。不同濃度白樺脂酸（10，20，40ug/ml）作用CNE-1細(xì)胞24小時(shí)后，低密度（5×102/空）接種于6孔板，靜置培養(yǎng)15天，計(jì)算細(xì)胞克隆數(shù)。10，20，40ug/ml白樺脂酸作用CNE-1細(xì)胞72小時(shí)后，倒置顯微鏡和透射電子顯微鏡下分別觀察白樺脂酸作用CNE-1細(xì)胞后的形態(tài)學(xué)變化，流式細(xì)胞儀檢測(cè)其對(duì)CNE-1細(xì)胞周期和凋亡的影響.提取濃度為20ug/ml和40ug/ml白樺脂酸作用72h后腫瘤細(xì)胞的RNA，計(jì)算R

3、NA的濃度及純度，設(shè)計(jì)并合成bcl-2和內(nèi)參照β－actin的上游引物和下游引物，以提取的 mRNA為模板，按照試劑盒說(shuō)明在PCR 儀中進(jìn)行 RT-PCR 反應(yīng)，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后，在凝膠成像儀下顯示結(jié)果，運(yùn)用 lab work 30.軟件分析結(jié)果，檢測(cè)試驗(yàn)組和對(duì)照組bcl-2 mRNA表達(dá)水平的差異。 結(jié)果： 1. 白樺脂酸對(duì)CNE-1細(xì)胞體外增殖的影響 MTT試驗(yàn)顯示不同濃度白樺脂酸對(duì)CNE-1細(xì)胞增殖有

4、抑制作用，抑制效果有時(shí)間和劑量依賴(lài)趨勢(shì)，隨時(shí)間延長(zhǎng)和濃度增加，抑制效果逐漸增強(qiáng)。24h,48h和72h的IC50分別為37.46ug/ml，24.28ug/ml，21.15ug/ml。細(xì)胞集落形成試驗(yàn)顯示白樺酯酸處理組克隆形成率與未處理的對(duì)照組比較明顯減少（p<0.01）.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示白樺脂酸作用后的CNE-1細(xì)胞出現(xiàn)G0/G1期的阻滯，而且阻滯程度隨作用藥物濃度增加而明顯，10，20，40ug/ml白樺脂酸處理組與空白對(duì)照組比較

5、G0/G1期比例分別為59.21％,72.20％,77.13％vs 42.94％ 2.白樺脂酸對(duì)CNE-1細(xì)胞凋亡的影響 白樺脂酸作用CNE-1細(xì)胞72小時(shí)后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變圓，胞漿內(nèi)溶酶體增多，線(xiàn)粒體腫脹，胞核皺縮，凋亡小體形成等典型的凋亡形態(tài)學(xué)變化；10,20,40ug/ml白樺脂酸處理CNE-1細(xì)胞72h后與空白組比較凋亡比例分別為（13.95％,14.71％,21.99％vs 4.02％，P<0.05）；RT-PCR