白樺脂酸對鼻咽癌細胞系CNE-1增殖，凋亡和Bcl-2表達的影響.pdf

1、目的： 惡性腫瘤的治療仍然是醫(yī)學(xué)的一大難題。目前，對腫瘤治療的方法有很多，主要有手術(shù)治療，化學(xué)治療和放療。對于有些不適合行手術(shù)治療的腫瘤，化療取得了不錯的治療效果。白樺脂酸是一種新近發(fā)現(xiàn)的具有廣泛抑瘤作用小分子化療藥物。本實驗通過研究白樺脂酸對鼻咽癌細胞系CNE-1增殖和凋亡的影響。 方法： 體外培養(yǎng)鼻咽癌細胞系CNE-1,加入不同濃度的白樺脂酸（5-160ug/ml），作用不同時間（24h,48h,72h）后M

2、TT法計算抑制率。不同濃度白樺脂酸（10，20，40ug/ml）作用CNE-1細胞24小時后，低密度（5×102/空）接種于6孔板，靜置培養(yǎng)15天，計算細胞克隆數(shù)。10，20，40ug/ml白樺脂酸作用CNE-1細胞72小時后，倒置顯微鏡和透射電子顯微鏡下分別觀察白樺脂酸作用CNE-1細胞后的形態(tài)學(xué)變化，流式細胞儀檢測其對CNE-1細胞周期和凋亡的影響.提取濃度為20ug/ml和40ug/ml白樺脂酸作用72h后腫瘤細胞的RNA，計算R

3、NA的濃度及純度，設(shè)計并合成bcl-2和內(nèi)參照β－actin的上游引物和下游引物，以提取的 mRNA為模板，按照試劑盒說明在PCR 儀中進行 RT-PCR 反應(yīng)，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后，在凝膠成像儀下顯示結(jié)果，運用 lab work 30.軟件分析結(jié)果，檢測試驗組和對照組bcl-2 mRNA表達水平的差異。 結(jié)果： 1. 白樺脂酸對CNE-1細胞體外增殖的影響 MTT試驗顯示不同濃度白樺脂酸對CNE-1細胞增殖有

4、抑制作用，抑制效果有時間和劑量依賴趨勢，隨時間延長和濃度增加，抑制效果逐漸增強。24h,48h和72h的IC50分別為37.46ug/ml，24.28ug/ml，21.15ug/ml。細胞集落形成試驗顯示白樺酯酸處理組克隆形成率與未處理的對照組比較明顯減少（p<0.01）.流式細胞術(shù)結(jié)果顯示白樺脂酸作用后的CNE-1細胞出現(xiàn)G0/G1期的阻滯，而且阻滯程度隨作用藥物濃度增加而明顯，10，20，40ug/ml白樺脂酸處理組與空白對照組比較

5、G0/G1期比例分別為59.21％,72.20％,77.13％vs 42.94％ 2.白樺脂酸對CNE-1細胞凋亡的影響 白樺脂酸作用CNE-1細胞72小時后，發(fā)現(xiàn)細胞變圓，胞漿內(nèi)溶酶體增多，線粒體腫脹，胞核皺縮，凋亡小體形成等典型的凋亡形態(tài)學(xué)變化；10,20,40ug/ml白樺脂酸處理CNE-1細胞72h后與空白組比較凋亡比例分別為（13.95％,14.71％,21.99％vs 4.02％，P<0.05）；RT-PCR