STGC3基因在鼻咽癌細胞系CNE2中抑瘤機制的初步研究.pdf

1、目的：前期研究顯示STGC3高表達，可以抑制CNE2細胞的生長，為進一步研究STGC3基因的抑瘤作用，觀測STGC3基因高表達對CNE2裸鼠體內(nèi)成瘤的影響，并探討其可能作用機制。 方法：采用Tet/pTRE-STGC3/CNE2細胞系接種于裸鼠皮下，Dox誘導STGC3基因高表達，觀測STGC3基因高表達對CNE2裸鼠體內(nèi)成瘤的影響。運用RT-PCR、免疫組織化學及蛋白質免疫印跡方法，分別從mRNA和蛋白質水平，分析瘤組織中ST

2、GC3基因表達；采用HE染色觀察瘤組織形態(tài)學改變；用流式細胞儀，檢測移植瘤組織中細胞的凋亡情況；用免疫組織化學方法，檢測移植瘤組織凋亡相關蛋白Bcl-2和Bax的表達。運用蛋白質組學相關技術，如二維電泳、圖像分析、質譜技術等方法，分析STGC3 對移植瘤組織中蛋白質表達譜的影響，篩選和鑒定與STGC3抑瘤作用相關的差異蛋白質。應用蛋白質免疫印跡驗證熱休克蛋白70在裸鼠移植瘤組織中的表達情況。 結果：STGC3蛋白質表達主要定位于

3、細胞核內(nèi)，Dox誘導STGC3基因在Tet/pTRE-STGC3/CNE2細胞系高表達后，Tet/pTRE-STGC3/CNE2細胞系裸鼠體內(nèi)成瘤受到明顯抑制，與對照組比較，移植瘤成瘤時間晚、生長慢、腫塊小、細胞凋亡率高；Bcl-2蛋白表達減弱，Bax蛋白表達增強，差異有顯著性意義(P<0.01)；蛋白組學實驗結果顯示：STGC3在移植瘤組織中高表達，肽酰輔氨酰順反式異構酶 A，絲切蛋白-1，抑制素和G蛋白表達上調(diào)，絲氨酸-蘇氨酸蛋白激

4、酶 WNK1，絲氨酸-蘇氨酸二肽富含性剪切因子 1和熱休克蛋白70表達下調(diào)。這些蛋白質涉及細胞骨架重構、細胞凋亡、細胞增殖、細胞免疫、分子伴侶和信號轉導等功能。應用蛋白質免疫印跡驗證熱休克蛋白70在裸鼠移植瘤組織中的表達情況，結果與蛋白組學實驗結果一致，說明蛋白組學結果較準確的反映了裸鼠移植瘤組織中蛋白質的表達情況。 結論： 1.STGC3高表達，使Bcl-2/Bax比值下降，促進CNE2細胞凋亡，抑制CNE2裸鼠移植瘤